基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2012年
1期
56-60
,共5页
杨浩%杨青平%查成喜%韩跃武
楊浩%楊青平%查成喜%韓躍武
양호%양청평%사성희%한약무
易错PCR%DNA-shuffling%单链抗体库
易錯PCR%DNA-shuffling%單鏈抗體庫
역착PCR%DNA-shuffling%단련항체고
目的 引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建高库容量的单链抗体库.方法 收集不同年龄、性别、健康状态的人的静脉血各5 mL,提取单个核细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增VH和VL基因,应用易错PCR对VH和VL基因进行突变,同时用DNA-shuffling技术对全长单链抗体基因进行体外改组,获得的分子与T载体连接,转化E.coli DH5α,选取阳性克隆,经菌落PCR后酶切鉴定抗体库多样性,计算分析单链抗体库容量.结果 成功构建了库容量为4.37×1013的单链抗体库,经酶切鉴定,初步判定抗体库多样性良好.结论 引入易错PCR和DNA-shuffling技术,成功构建了单链抗体库,为后续筛选高亲和力抗体奠定了实验基础.
目的 引入易錯PCR和DNA-shuffling技術構建高庫容量的單鏈抗體庫.方法 收集不同年齡、性彆、健康狀態的人的靜脈血各5 mL,提取單箇覈細胞總RNA,反轉錄為cDNA,PCR擴增VH和VL基因,應用易錯PCR對VH和VL基因進行突變,同時用DNA-shuffling技術對全長單鏈抗體基因進行體外改組,穫得的分子與T載體連接,轉化E.coli DH5α,選取暘性剋隆,經菌落PCR後酶切鑒定抗體庫多樣性,計算分析單鏈抗體庫容量.結果 成功構建瞭庫容量為4.37×1013的單鏈抗體庫,經酶切鑒定,初步判定抗體庫多樣性良好.結論 引入易錯PCR和DNA-shuffling技術,成功構建瞭單鏈抗體庫,為後續篩選高親和力抗體奠定瞭實驗基礎.
목적 인입역착PCR화DNA-shuffling기술구건고고용량적단련항체고.방법 수집불동년령、성별、건강상태적인적정맥혈각5 mL,제취단개핵세포총RNA,반전록위cDNA,PCR확증VH화VL기인,응용역착PCR대VH화VL기인진행돌변,동시용DNA-shuffling기술대전장단련항체기인진행체외개조,획득적분자여T재체련접,전화E.coli DH5α,선취양성극륭,경균락PCR후매절감정항체고다양성,계산분석단련항체고용량.결과 성공구건료고용량위4.37×1013적단련항체고,경매절감정,초보판정항체고다양성량호.결론 인입역착PCR화DNA-shuffling기술,성공구건료단련항체고,위후속사선고친화력항체전정료실험기출.
