中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2012年
1期
20-25
,共6页
张怡堃%王华%杨萍%李泽良%杨月峰%陈协群%王立生
張怡堃%王華%楊萍%李澤良%楊月峰%陳協群%王立生
장이곤%왕화%양평%리택량%양월봉%진협군%왕립생
微RNAs%细胞凋亡%基因表达%质粒%腺病毒科%骨髓瘤
微RNAs%細胞凋亡%基因錶達%質粒%腺病毒科%骨髓瘤
미RNAs%세포조망%기인표체%질립%선병독과%골수류
目的 制备携带miR29c的重组腺病毒Ad5F 11 p-miR29c,评价miR29c对骨髓瘤细胞凋亡的影响.方法 巢式PCR扩增得到hsa-miR29c,将hsa-miR29c基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,得到pShuttle-CMV-miR29c.鉴定正确后,PmeI线性化并转化含Ad5F11p骨架质粒的BJ5183感受态细胞,重组获得腺病毒载体.PacI线性化的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞,制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.以对照病毒Ad5F11p-EGFP感染人骨髓瘤细胞系SKO-007、U266和XG7,通过流式细胞术确定最佳感染复数.Ad5F 11p-miR29c以最佳感染复数感染骨髓瘤细胞,流式细胞术检测miR29c对细胞凋亡的影响.结果 PCR扩增获得miR29c基因,成功将其连接到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,经测序鉴定正确.采用Ad-easy系统,成功构建并制备了CMV启动的重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.流式细胞术结果显示,Ad5F11p-EGFP对SKO-007和U266细胞的最佳感染复数为150 MOI;而XG7为100 MOI.Ad5F11p-miR29c以最佳感染复数感染细胞48 h后,细胞凋亡率升高.SKO-007细胞的凋亡率达到26.5％,XG7细胞的凋亡率达到46.9％.结论 成功制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c,并证实miR29c能够诱导骨髓瘤细胞凋亡.
目的 製備攜帶miR29c的重組腺病毒Ad5F 11 p-miR29c,評價miR29c對骨髓瘤細胞凋亡的影響.方法 巢式PCR擴增得到hsa-miR29c,將hsa-miR29c基因剋隆到腺病毒穿梭質粒pShuttle-CMV,得到pShuttle-CMV-miR29c.鑒定正確後,PmeI線性化併轉化含Ad5F11p骨架質粒的BJ5183感受態細胞,重組穫得腺病毒載體.PacI線性化的重組腺病毒質粒轉染HEK293細胞,製備重組腺病毒Ad5F11p-miR29c.以對照病毒Ad5F11p-EGFP感染人骨髓瘤細胞繫SKO-007、U266和XG7,通過流式細胞術確定最佳感染複數.Ad5F 11p-miR29c以最佳感染複數感染骨髓瘤細胞,流式細胞術檢測miR29c對細胞凋亡的影響.結果 PCR擴增穫得miR29c基因,成功將其連接到腺病毒穿梭質粒pShuttle-CMV,經測序鑒定正確.採用Ad-easy繫統,成功構建併製備瞭CMV啟動的重組腺病毒Ad5F11p-miR29c.流式細胞術結果顯示,Ad5F11p-EGFP對SKO-007和U266細胞的最佳感染複數為150 MOI;而XG7為100 MOI.Ad5F11p-miR29c以最佳感染複數感染細胞48 h後,細胞凋亡率升高.SKO-007細胞的凋亡率達到26.5％,XG7細胞的凋亡率達到46.9％.結論 成功製備重組腺病毒Ad5F11p-miR29c,併證實miR29c能夠誘導骨髓瘤細胞凋亡.
목적 제비휴대miR29c적중조선병독Ad5F 11 p-miR29c,평개miR29c대골수류세포조망적영향.방법 소식PCR확증득도hsa-miR29c,장hsa-miR29c기인극륭도선병독천사질립pShuttle-CMV,득도pShuttle-CMV-miR29c.감정정학후,PmeI선성화병전화함Ad5F11p골가질립적BJ5183감수태세포,중조획득선병독재체.PacI선성화적중조선병독질립전염HEK293세포,제비중조선병독Ad5F11p-miR29c.이대조병독Ad5F11p-EGFP감염인골수류세포계SKO-007、U266화XG7,통과류식세포술학정최가감염복수.Ad5F 11p-miR29c이최가감염복수감염골수류세포,류식세포술검측miR29c대세포조망적영향.결과 PCR확증획득miR29c기인,성공장기련접도선병독천사질립pShuttle-CMV,경측서감정정학.채용Ad-easy계통,성공구건병제비료CMV계동적중조선병독Ad5F11p-miR29c.류식세포술결과현시,Ad5F11p-EGFP대SKO-007화U266세포적최가감염복수위150 MOI;이XG7위100 MOI.Ad5F11p-miR29c이최가감염복수감염세포48 h후,세포조망솔승고.SKO-007세포적조망솔체도26.5％,XG7세포적조망솔체도46.9％.결론 성공제비중조선병독Ad5F11p-miR29c,병증실miR29c능구유도골수류세포조망.
