浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2012年
1期
69-74
,共6页
舒莉萍%何志旭%姚冬静%马健娟%李涛%叶芝旭
舒莉萍%何誌旭%姚鼕靜%馬健娟%李濤%葉芝旭
서리평%하지욱%요동정%마건연%리도%협지욱
寡核苷酸类,反义/遗传学%原位杂交%基因表达%斑马鱼%胚胎发育%遗传载体%质粒/遗传学%转染%内皮,血管/细胞学
寡覈苷痠類,反義/遺傳學%原位雜交%基因錶達%斑馬魚%胚胎髮育%遺傳載體%質粒/遺傳學%轉染%內皮,血管/細胞學
과핵감산류,반의/유전학%원위잡교%기인표체%반마어%배태발육%유전재체%질립/유전학%전염%내피,혈관/세포학
目的:为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况.方法:提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基因片段,将得到的hoxd3基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、Xba Ⅰ双酶切后插入pCS2+质粒中,挑选阳性克隆,通过双酶切、菌落PCR以及测序鉴定；将pCS2+ -hoxd3重组子经EcoRⅠ酶切线性化,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的hoxd3基因的反义mRNA探针.用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交.结果:构建和鉴定了pCS2+ -hoxd3重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测hoxd3基因的表达,发现在Tuebingen野生型斑马鱼受精后24 h～72 h胚胎的中脑后脑交界处以及后脑中可以观察到hoxd3基因的表达.结论:hoxd3基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统高表达,未发现在血管生成区域的表达.
目的:為探討hoxd3基因在斑馬魚髮育過程中與血管形成可能的作用機製,用hoxd3基因的反義mRNA探針進行斑馬魚全胚胎原位雜交,觀測hoxd3基因在野生型斑馬魚胚胎髮育過程中的錶達情況.方法:提取斑馬魚胚胎總RNA,經RT-PCR擴增斑馬魚hoxd3基因片段,將得到的hoxd3基因片段和pCS2+質粒經EcoRⅠ、Xba Ⅰ雙酶切後插入pCS2+質粒中,挑選暘性剋隆,通過雙酶切、菌落PCR以及測序鑒定；將pCS2+ -hoxd3重組子經EcoRⅠ酶切線性化,經T3RNA體外轉錄體繫閤成地高辛標記的hoxd3基因的反義mRNA探針.用hoxd3基因的反義mRNA探針進行斑馬魚全胚胎原位雜交.結果:構建和鑒定瞭pCS2+ -hoxd3重組質粒,經斑馬魚全胚胎原位雜交檢測hoxd3基因的錶達,髮現在Tuebingen野生型斑馬魚受精後24 h～72 h胚胎的中腦後腦交界處以及後腦中可以觀察到hoxd3基因的錶達.結論:hoxd3基因在Tuebingen野生型斑馬魚胚胎髮育早期的神經繫統高錶達,未髮現在血管生成區域的錶達.
목적:위탐토hoxd3기인재반마어발육과정중여혈관형성가능적작용궤제,용hoxd3기인적반의mRNA탐침진행반마어전배태원위잡교,관측hoxd3기인재야생형반마어배태발육과정중적표체정황.방법:제취반마어배태총RNA,경RT-PCR확증반마어hoxd3기인편단,장득도적hoxd3기인편단화pCS2+질립경EcoRⅠ、Xba Ⅰ쌍매절후삽입pCS2+질립중,도선양성극륭,통과쌍매절、균락PCR이급측서감정；장pCS2+ -hoxd3중조자경EcoRⅠ매절선성화,경T3RNA체외전록체계합성지고신표기적hoxd3기인적반의mRNA탐침.용hoxd3기인적반의mRNA탐침진행반마어전배태원위잡교.결과:구건화감정료pCS2+ -hoxd3중조질립,경반마어전배태원위잡교검측hoxd3기인적표체,발현재Tuebingen야생형반마어수정후24 h～72 h배태적중뇌후뇌교계처이급후뇌중가이관찰도hoxd3기인적표체.결론:hoxd3기인재Tuebingen야생형반마어배태발육조기적신경계통고표체,미발현재혈관생성구역적표체.
