CAJ | 학술논문

目的克隆源自临床分离的幽门螺杆菌(Hp)菌株CagA DNA序列,比较其C-端氨基酸序列与国外菌株的差异,并分析其磷酸化能力和转染胃上皮细胞后的生物学功能.方法从39株临床分离的Hp DNA基因组中用PCR方法扩增cagA C-端DNA,经琼脂糖凝胶电泳后割胶回收DNA片段进行测序.分别构建cagA的原核细胞和真核细胞表达载体并进行CagA C-端氨基酸磷酸化能力测定.结果有38株菌株检测到CagADNA片段,CagA阳性率为97.4%(38/39).测序后发现,克隆的38株阳性菌株CagA蛋白均仅含1个重复序列和2～4个串联的谷氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-酪氨酸-丙氨酸(EPIYA)序列,且在重复序列的D2区氨基酸序列均为天冬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸(DFD).来自胃癌和非胃癌患者的CagA蛋白串联的EPIYA序列数目差异无显著性.用原核细胞表达的CagA蛋白进行体外磷酸化试验,重复序列中的酪氨酸能被磷酸化,其余的在EPIYA中的酪氨酸也能被磷酸化,但转染的AGS细胞株中仅重复序列中的酪氨酸能被磷酸化.在转染AGS细胞株后少数细胞(＜10%)因骨架重构而出现典型的"蜂鸟"样改变,与直接用Hp感染AGS细胞时类似,且对转染的AGS细胞再用Hp感染后,其"蜂鸟"样细胞的百分比也无明显增加.结论源自国人的HpCagA蛋白结构不同于欧美国家.Hp的CagA蛋白C-端多样性可能与其功能无关,且各株Hp菌CagA C-端功能可能是相同的.
목적극륭원자림상분리적유문라간균(Hp)균주CagA DNA서렬,비교기C-단안기산서렬여국외균주적차이,병분석기린산화능력화전염위상피세포후적생물학공능.방법종39주림상분리적Hp DNA기인조중용PCR방법확증cagA C-단DNA,경경지당응효전영후할효회수DNA편단진행측서.분별구건cagA적원핵세포화진핵세포표체재체병진행CagA C-단안기산린산화능력측정.결과유38주균주검측도CagADNA편단,CagA양성솔위97.4%(38/39).측서후발현,극륭적38주양성균주CagA단백균부함1개중복서렬화2～4개천련적곡안산-포안산-이량안산-락안산-병안산(EPIYA)서렬,차재중복서렬적D2구안기산서렬균위천동안산-분병안산-천동안산(DFD).래자위암화비위암환자적CagA단백천련적EPIYA서렬수목차이무현저성.용원핵세포표체적CagA단백진행체외린산화시험,중복서렬중적락안산능피린산화,기여적재EPIYA중적락안산야능피린산화,단전염적AGS세포주중부중복서렬중적락안산능피린산화.재전염AGS세포주후소수세포(＜10%)인골가중구이출현전형적"봉조"양개변,여직접용Hp감염AGS세포시유사,차대전염적AGS세포재용Hp감염후,기"봉조"양세포적백분비야무명현증가.결론원자국인적HpCagA단백결구불동우구미국가.Hp적CagA단백C-단다양성가능여기공능무관,차각주Hp균CagA C-단공능가능시상동적.