中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2004年
1期
11-14
,共4页
pMAL- c2X质粒%N-氨甲酰- D-氨基酸酰胺水解酶%麦芽糖结合蛋白%融合表达%亲和层析
pMAL- c2X質粒%N-氨甲酰- D-氨基痠酰胺水解酶%麥芽糖結閤蛋白%融閤錶達%親和層析
pMAL- c2X질립%N-안갑선- D-안기산선알수해매%맥아당결합단백%융합표체%친화층석
将菌株 SS-ori的 N-氨甲酰- D-氨基酸酰胺水解酶基因( Dcase)插入到 pMAL- c2X载体中,构建表达产物为麦芽糖结合蛋白( MBP)与 Dcase融合的重组子.该重组子在 E.coli BL21中的表达产物为融合蛋白 MBP- Dcase (76.4ka),光密度扫描表明,其表达量约占菌体超声后离心上清总蛋白的 19%.经 Amylose亲和纯化和 Superose 12凝胶排阻层析后达到了电泳纯.根据 pMAL- c2X的背景,用 Factor Xa剪切后,可得约 41.7ka的 MBP和 34.7ka的 Dcase.酶活性检测表明当用 N-氨甲酰- DL-缬氨酸做为底物 ,A600=10时,每升菌体每小时可产生 D-缬氨酸 0.78g.
將菌株 SS-ori的 N-氨甲酰- D-氨基痠酰胺水解酶基因( Dcase)插入到 pMAL- c2X載體中,構建錶達產物為麥芽糖結閤蛋白( MBP)與 Dcase融閤的重組子.該重組子在 E.coli BL21中的錶達產物為融閤蛋白 MBP- Dcase (76.4ka),光密度掃描錶明,其錶達量約佔菌體超聲後離心上清總蛋白的 19%.經 Amylose親和純化和 Superose 12凝膠排阻層析後達到瞭電泳純.根據 pMAL- c2X的揹景,用 Factor Xa剪切後,可得約 41.7ka的 MBP和 34.7ka的 Dcase.酶活性檢測錶明噹用 N-氨甲酰- DL-纈氨痠做為底物 ,A600=10時,每升菌體每小時可產生 D-纈氨痠 0.78g.
장균주 SS-ori적 N-안갑선- D-안기산선알수해매기인( Dcase)삽입도 pMAL- c2X재체중,구건표체산물위맥아당결합단백( MBP)여 Dcase융합적중조자.해중조자재 E.coli BL21중적표체산물위융합단백 MBP- Dcase (76.4ka),광밀도소묘표명,기표체량약점균체초성후리심상청총단백적 19%.경 Amylose친화순화화 Superose 12응효배조층석후체도료전영순.근거 pMAL- c2X적배경,용 Factor Xa전절후,가득약 41.7ka적 MBP화 34.7ka적 Dcase.매활성검측표명당용 N-안갑선- DL-힐안산주위저물 ,A600=10시,매승균체매소시가산생 D-힐안산 0.78g.
