铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定
동록가단포균서균체PaP3말단매대아단위DNA결합능력적측정
Determination of binding ability of PaP3's terminase large subunit to cos site
  • 万方数据
    第三军医大学学报 제삼군의대학학보
    ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
    2006年 22期 2205-2208 ,共4页

    申晓冬%张克斌%李明%周莹冰%蹇锐%胡晓梅%陈志瑾%饶贤才%胡福泉

    신효동%장극빈%리명%주형빙%건예%호효매%진지근%요현재%호복천

    末端酶大亚单位%噬菌体PaP3%EMSA%蛋白表达 末耑酶大亞單位%噬菌體PaP3%EMSA%蛋白錶達
    말단매대아단위%서균체PaP3%EMSA%단백표체
    目的 检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力.方法 通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过Ni-NTA亲和层析,分离出重组目的蛋白rTLS,透析复性后,与生物素标记的基因组末端cos片段进行结合反应,通过EMSA检测DNA滞后现象.结果 成功构建了表达载体pQE-tls,获得了纯化的具有生物学活性的重组末端酶大亚单位rTLS,EMSA结果证实结合rTLS后的cos片段与无蛋白加入的对照组相比明显滞后.结论 重组噬菌体PaP3末端酶大亚单位在体外可与基因组末端cos片段发生特异性结合,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
    목적 검측동록가단포균서균체PaP3말단매대아단위여서균체기인조말단cos위점적결합능력.방법 통과PCR확증출말단매대아단위편마기인tls,경pMD-T18재체극륭지표체재체pQE31상,IPTG유도표체,획득포함체단백,용포함체렬해액용해포함체,통과Ni-NTA친화층석,분리출중조목적단백rTLS,투석복성후,여생물소표기적기인조말단cos편단진행결합반응,통과EMSA검측DNA체후현상.결과 성공구건료표체재체pQE-tls,획득료순화적구유생물학활성적중조말단매대아단위rTLS,EMSA결과증실결합rTLS후적cos편단여무단백가입적대조조상비명현체후.결론 중조서균체PaP3말단매대아단위재체외가여기인조말단cos편단발생특이성결합,위진일보연구해단백적공능전정료기출.
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