现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2008年
2期
126-131
,共6页
汪光蓉%张国元%杨健%唐中%唐恩洁%朱道银
汪光蓉%張國元%楊健%唐中%唐恩潔%硃道銀
왕광용%장국원%양건%당중%당은길%주도은
乙型肝炎%shRNA%RNA干扰%动物模型
乙型肝炎%shRNA%RNA榦擾%動物模型
을형간염%shRNA%RNA간우%동물모형
构建针对乙肝病毒HBeAg前c/c区(HBV prec/c)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(psiHBV),观察其在体内外对HBV复制的抑制作用.构建RNA干扰真核表达载体psiHBV,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染HeLa细胞,用微粒子化学发光分析仪(MEIA)分别检测细胞上清和细胞裂解液中HBeAg表达水平;用半定量PCR检测prec/cmRNA的转录情况.随后用水动力学方法,向小鼠尾静脉注射pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型.采用此感染模型,将pHBV1.5与在体外实验筛选到有明显抑制作用的shRNA表达载体(psiHBV4)共注射,注射后第6天用同样方法检测其干扰效果.结果显示,成功构建了针对HBV前c/c区的shRNA表达载体psiHBV4、psiHBV5,psiHBV6及无关shRNA表达载体psiC,筛选到在体外对HBeAg有明显的抑制作用的psiHBV4载体;注射pHBV1.5的动物血清高表达HBsAg和HBeAg.而共注射干扰性psiHBV4明显抑制了HBeAg的表达,与单纯感染组相比有显著差异,RT-PCR显示肝内HBV C mRNA水平亦明显降低.上述结果表明,siRNA能特异抑制HBV的复制和表达,对乙型肝炎的治疗有潜在应用前景.
構建針對乙肝病毒HBeAg前c/c區(HBV prec/c)的短髮夾環RNA(shRNA)質粒(psiHBV),觀察其在體內外對HBV複製的抑製作用.構建RNA榦擾真覈錶達載體psiHBV,與1.5倍HBV真覈錶達質粒pHBV1.5共轉染HeLa細胞,用微粒子化學髮光分析儀(MEIA)分彆檢測細胞上清和細胞裂解液中HBeAg錶達水平;用半定量PCR檢測prec/cmRNA的轉錄情況.隨後用水動力學方法,嚮小鼠尾靜脈註射pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型.採用此感染模型,將pHBV1.5與在體外實驗篩選到有明顯抑製作用的shRNA錶達載體(psiHBV4)共註射,註射後第6天用同樣方法檢測其榦擾效果.結果顯示,成功構建瞭針對HBV前c/c區的shRNA錶達載體psiHBV4、psiHBV5,psiHBV6及無關shRNA錶達載體psiC,篩選到在體外對HBeAg有明顯的抑製作用的psiHBV4載體;註射pHBV1.5的動物血清高錶達HBsAg和HBeAg.而共註射榦擾性psiHBV4明顯抑製瞭HBeAg的錶達,與單純感染組相比有顯著差異,RT-PCR顯示肝內HBV C mRNA水平亦明顯降低.上述結果錶明,siRNA能特異抑製HBV的複製和錶達,對乙型肝炎的治療有潛在應用前景.
구건침대을간병독HBeAg전c/c구(HBV prec/c)적단발협배RNA(shRNA)질립(psiHBV),관찰기재체내외대HBV복제적억제작용.구건RNA간우진핵표체재체psiHBV,여1.5배HBV진핵표체질립pHBV1.5공전염HeLa세포,용미입자화학발광분석의(MEIA)분별검측세포상청화세포렬해액중HBeAg표체수평;용반정량PCR검측prec/cmRNA적전록정황.수후용수동역학방법,향소서미정맥주사pHBV1.5건립소서급성을형간염병독감염모형.채용차감염모형,장pHBV1.5여재체외실험사선도유명현억제작용적shRNA표체재체(psiHBV4)공주사,주사후제6천용동양방법검측기간우효과.결과현시,성공구건료침대HBV전c/c구적shRNA표체재체psiHBV4、psiHBV5,psiHBV6급무관shRNA표체재체psiC,사선도재체외대HBeAg유명현적억제작용적psiHBV4재체;주사pHBV1.5적동물혈청고표체HBsAg화HBeAg.이공주사간우성psiHBV4명현억제료HBeAg적표체,여단순감염조상비유현저차이,RT-PCR현시간내HBV C mRNA수평역명현강저.상술결과표명,siRNA능특이억제HBV적복제화표체,대을형간염적치료유잠재응용전경.
