生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
43-46
,共4页
樊欣迎%包乐媛%朱婧%刘翊%杜连祥
樊訢迎%包樂媛%硃婧%劉翊%杜連祥
번흔영%포악원%주청%류익%두련상
白细胞介素24%表皮生长因子受体干扰序列%融合蛋白%原核表达
白細胞介素24%錶皮生長因子受體榦擾序列%融閤蛋白%原覈錶達
백세포개소24%표피생장인자수체간우서렬%융합단백%원핵표체
目的:在大肠杆菌中表达表皮生长因子受体干扰序列(EGFRi)与白细胞介素24(IL-24)的融合蛋白.方法:人工合成肿瘤细胞表面受体特异性结合位点EGFRi核苷酸序列,应用重叠延伸PCR技术将其与IL-24基因连接,其间引入一段柔软短肽编码基因;将融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达条件进行优化;用His·Bind纯化试剂盒对表达产物进行纯化,SDS-PAGE进行鉴定.结果:酶切和测序结果证实EGFRi-IL-24融合基因的原核表达载体构建正确;在IPTG浓度为0.8 mol/L、280C诱导10 h的条件下,可溶性融合蛋白表达量最高;表达产物的相对分子质量与预期值一致,为22 000;经纯化得到了均一的融合蛋白.结论:获得大肠杆菌表达的融合蛋白EGFRi-IL-2,可用于活性分析.
目的:在大腸桿菌中錶達錶皮生長因子受體榦擾序列(EGFRi)與白細胞介素24(IL-24)的融閤蛋白.方法:人工閤成腫瘤細胞錶麵受體特異性結閤位點EGFRi覈苷痠序列,應用重疊延伸PCR技術將其與IL-24基因連接,其間引入一段柔軟短肽編碼基因;將融閤基因剋隆入pET-22b原覈錶達載體,IPTG誘導融閤蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達,對錶達條件進行優化;用His·Bind純化試劑盒對錶達產物進行純化,SDS-PAGE進行鑒定.結果:酶切和測序結果證實EGFRi-IL-24融閤基因的原覈錶達載體構建正確;在IPTG濃度為0.8 mol/L、280C誘導10 h的條件下,可溶性融閤蛋白錶達量最高;錶達產物的相對分子質量與預期值一緻,為22 000;經純化得到瞭均一的融閤蛋白.結論:穫得大腸桿菌錶達的融閤蛋白EGFRi-IL-2,可用于活性分析.
목적:재대장간균중표체표피생장인자수체간우서렬(EGFRi)여백세포개소24(IL-24)적융합단백.방법:인공합성종류세포표면수체특이성결합위점EGFRi핵감산서렬,응용중첩연신PCR기술장기여IL-24기인련접,기간인입일단유연단태편마기인;장융합기인극륭입pET-22b원핵표체재체,IPTG유도융합단백재대장간균BL21(DE3)중표체,대표체조건진행우화;용His·Bind순화시제합대표체산물진행순화,SDS-PAGE진행감정.결과:매절화측서결과증실EGFRi-IL-24융합기인적원핵표체재체구건정학;재IPTG농도위0.8 mol/L、280C유도10 h적조건하,가용성융합단백표체량최고;표체산물적상대분자질량여예기치일치,위22 000;경순화득도료균일적융합단백.결론:획득대장간균표체적융합단백EGFRi-IL-2,가용우활성분석.
