浙江医学
浙江醫學
절강의학
ZHEJIANG MEDICAL JOURNAL
2009年
8期
1064-1066,1078
,共4页
金晗英%陈智%羊正纲%潘修成
金晗英%陳智%羊正綱%潘脩成
금함영%진지%양정강%반수성
HBV%腺病毒载体%RNA干扰
HBV%腺病毒載體%RNA榦擾
HBV%선병독재체%RNA간우
目的 构建可同时表达绿荧光蛋白(GFP)和针对HBV S区基因的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒,并研究该siRNA在体外对HBV的抑制作用.方法 采用PCR技术自质粒pEGFP-C1中扩增含CMV启动子的GFP表达框,自质粒pAVU6+4sh579中扩增含U6启动子的针对HBV S区579-597位基因的siRNA表达框,分别将两个表达框克隆至穿梭载体质粒pShuttle内,与质粒pADEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,将阳性重组体DNA转染至人胚肾细胞株HEK293细胞中进行包装、扩增,并在HepG2.2.15细胞中初步观察其对HBV复制的抑制疗效.结果 构建了可同时表达GFP和siRNA的重组腺病毒.其可在HEK293细胞中进行包装、扩增,并在HepG2.2.15细胞中对HBV-DNA、HBsAg和HBeAg的表达具有抑制作用.结论 成功构建了可同时表达GFP和针对HBV的siRNA的重组腺病毒,并在体外实验中证实了其对HBV复制具有抑制作用.
目的 構建可同時錶達綠熒光蛋白(GFP)和針對HBV S區基因的小榦擾RNA(siRNA)的重組腺病毒,併研究該siRNA在體外對HBV的抑製作用.方法 採用PCR技術自質粒pEGFP-C1中擴增含CMV啟動子的GFP錶達框,自質粒pAVU6+4sh579中擴增含U6啟動子的針對HBV S區579-597位基因的siRNA錶達框,分彆將兩箇錶達框剋隆至穿梭載體質粒pShuttle內,與質粒pADEasy-1在大腸桿菌BJ5183內進行同源重組,將暘性重組體DNA轉染至人胚腎細胞株HEK293細胞中進行包裝、擴增,併在HepG2.2.15細胞中初步觀察其對HBV複製的抑製療效.結果 構建瞭可同時錶達GFP和siRNA的重組腺病毒.其可在HEK293細胞中進行包裝、擴增,併在HepG2.2.15細胞中對HBV-DNA、HBsAg和HBeAg的錶達具有抑製作用.結論 成功構建瞭可同時錶達GFP和針對HBV的siRNA的重組腺病毒,併在體外實驗中證實瞭其對HBV複製具有抑製作用.
목적 구건가동시표체록형광단백(GFP)화침대HBV S구기인적소간우RNA(siRNA)적중조선병독,병연구해siRNA재체외대HBV적억제작용.방법 채용PCR기술자질립pEGFP-C1중확증함CMV계동자적GFP표체광,자질립pAVU6+4sh579중확증함U6계동자적침대HBV S구579-597위기인적siRNA표체광,분별장량개표체광극륭지천사재체질립pShuttle내,여질립pADEasy-1재대장간균BJ5183내진행동원중조,장양성중조체DNA전염지인배신세포주HEK293세포중진행포장、확증,병재HepG2.2.15세포중초보관찰기대HBV복제적억제료효.결과 구건료가동시표체GFP화siRNA적중조선병독.기가재HEK293세포중진행포장、확증,병재HepG2.2.15세포중대HBV-DNA、HBsAg화HBeAg적표체구유억제작용.결론 성공구건료가동시표체GFP화침대HBV적siRNA적중조선병독,병재체외실험중증실료기대HBV복제구유억제작용.
