广西农业科学
廣西農業科學
엄서농업과학
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
4期
366-370
,共5页
熊文婕%谢芝勋%唐熠%谢丽基%刘加波%庞耀姗%邓显文%谢志勤
熊文婕%謝芝勛%唐熠%謝麗基%劉加波%龐耀姍%鄧顯文%謝誌勤
웅문첩%사지훈%당습%사려기%류가파%방요산%산현문%사지근
禽呼肠孤病毒%δC基因%δNS基因%SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR%相对定量
禽呼腸孤病毒%δC基因%δNS基因%SYBR Green Ⅰ實時熒光定量RT-PCR%相對定量
금호장고병독%δC기인%δNS기인%SYBR Green Ⅰ실시형광정량RT-PCR%상대정량
为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,梯度倍比稀释作为标准品,用于构建SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测δC、δNS基因及内参基因β-actin的标准曲线.结果表明,建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2均在0.99以上;最小检出量为10拷贝/μL的阳性标准品,且具有良好的重复性,能够校正抽提样品中细胞数量不均带来的差异.可见,SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法能满足检测微量样品中禽呼肠孤病毒δC和δNS基因表达的要求,具有快速、敏感性高、重复性好等特点.
為建立一種定量檢測禽呼腸孤病毒δC和δNS基因的SYBR Green Ⅰ實時熒光定量RT-PCR方法,針對δC、δNS基因分彆設計瞭1對特異性引物,同時選擇瞭1對內參基因β-actin引物,將常規PCR擴增的片段分彆連接到pMD18-T載體上構建重組質粒,經篩選、鑒定純化後,梯度倍比稀釋作為標準品,用于構建SYBR Green Ⅰ實時熒光定量RT-PCR檢測δC、δNS基因及內參基因β-actin的標準麯線.結果錶明,建立的標準麯線具有良好的線性關繫,R2均在0.99以上;最小檢齣量為10拷貝/μL的暘性標準品,且具有良好的重複性,能夠校正抽提樣品中細胞數量不均帶來的差異.可見,SYBR Green Ⅰ實時熒光定量RT-PCR方法能滿足檢測微量樣品中禽呼腸孤病毒δC和δNS基因錶達的要求,具有快速、敏感性高、重複性好等特點.
위건립일충정량검측금호장고병독δC화δNS기인적SYBR Green Ⅰ실시형광정량RT-PCR방법,침대δC、δNS기인분별설계료1대특이성인물,동시선택료1대내삼기인β-actin인물,장상규PCR확증적편단분별련접도pMD18-T재체상구건중조질립,경사선、감정순화후,제도배비희석작위표준품,용우구건SYBR Green Ⅰ실시형광정량RT-PCR검측δC、δNS기인급내삼기인β-actin적표준곡선.결과표명,건립적표준곡선구유량호적선성관계,R2균재0.99이상;최소검출량위10고패/μL적양성표준품,차구유량호적중복성,능구교정추제양품중세포수량불균대래적차이.가견,SYBR Green Ⅰ실시형광정량RT-PCR방법능만족검측미량양품중금호장고병독δC화δNS기인표체적요구,구유쾌속、민감성고、중복성호등특점.
