CAJ | 학술논문

目的:探讨野生型XPD基因对人胆管癌QBC939细胞的生物学影响. 方法:用碱裂解法提取空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2-XPD,提取出的质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定.实验分4组,重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体组,并用具有相同遗传背景和代数的QBC939细胞作为空白对照.用脂质体转染法瞬时转染四组细胞.荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白报告基因表达情况.提取各组细胞总RNA,合成cDNA,用聚合酶链反应(PCR)检测4组细胞中XPD、p53、cyclin D1、c-myc表达情况.并用四甲基偶氮唑盐(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化. 结果:pEGFP-N2-XPD细胞与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组相比,XPD mRNA表达量明显增加(0.778±0.018 vs 0.561±0.039,0.544±0.035,0.542±0.034,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞中p53 mRNA相对表达量与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组比较具有统计学意义(0.421±0.019 vs 0.256±0.014,0.267±0.015,0.274±0.018,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,cyclin D1 mRNA相对表达量明显降低(0.339±0.041 vs 0.560±0.039,0.558±0.050,0.560±0.041,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,c-myc mRNA相对表达量明显降低(0.355±0.045 vs 0.570±0.075,0.560±0.041,0.537±0.050,均P<0.01).流式细胞仪检测pEGFP-N2-XPD组细胞周期G1期为81.65%,S期为11.83%,其他组G1期分别为65.54%、56.61%、63.26%;S期分别为24.10%、29.52%、27.28%,结果具有统计学意义(P<0.05).MTT检测示pEGFP-N2-XPD细胞生长率为0.249±0.02,与其他组相比,细胞增殖力明显减弱(P<0.01). 结论:野生型XPD基因可以抑制胆管癌细胞的生长,XPD基因可抑制c-myc、cyclin D1基因的表达,增加p53基因表达.
목적:탐토야생형XPD기인대인담관암QBC939세포적생물학영향. 방법:용감렬해법제취공재질립pEGFP-N2화중조질립pEGFP-N2-XPD,제취출적질립이KPNⅠ、BGIⅡ화SPHⅠ매절감정.실험분4조,중조질립pEGFP-N2-XPD조、공재질립pEGFP-N2조、지질체조,병용구유상동유전배경화대수적QBC939세포작위공백대조.용지질체전염법순시전염사조세포.형광현미경하관찰전염후록색형광단백보고기인표체정황.제취각조세포총RNA,합성cDNA,용취합매련반응(PCR)검측4조세포중XPD、p53、cyclin D1、c-myc표체정황.병용사갑기우담서염(MTT)화류식세포의검측세포증식급기세포주기적변화. 결과:pEGFP-N2-XPD세포여pEGFP-N2、지질체조화공백대조조상비,XPD mRNA표체량명현증가(0.778±0.018 vs 0.561±0.039,0.544±0.035,0.542±0.034,균P<0.01).pEGFP-N2-XPD세포중p53 mRNA상대표체량여pEGFP-N2、지질체조화공백대조조비교구유통계학의의(0.421±0.019 vs 0.256±0.014,0.267±0.015,0.274±0.018,균P<0.01).pEGFP-N2-XPD세포여기타조상비,cyclin D1 mRNA상대표체량명현강저(0.339±0.041 vs 0.560±0.039,0.558±0.050,0.560±0.041,균P<0.01).pEGFP-N2-XPD세포여기타조상비,c-myc mRNA상대표체량명현강저(0.355±0.045 vs 0.570±0.075,0.560±0.041,0.537±0.050,균P<0.01).류식세포의검측pEGFP-N2-XPD조세포주기G1기위81.65%,S기위11.83%,기타조G1기분별위65.54%、56.61%、63.26%;S기분별위24.10%、29.52%、27.28%,결과구유통계학의의(P<0.05).MTT검측시pEGFP-N2-XPD세포생장솔위0.249±0.02,여기타조상비,세포증식력명현감약(P<0.01). 결론:야생형XPD기인가이억제담관암세포적생장,XPD기인가억제c-myc、cyclin D1기인적표체,증가p53기인표체.