西南国防医药
西南國防醫藥
서남국방의약
MEDICAL JOURNAL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN SOUTHWEST CHINA
2010年
11期
1169-1172
,共4页
朱国强%李袁飞%冯晋斌%胡德华
硃國彊%李袁飛%馮晉斌%鬍德華
주국강%리원비%풍진빈%호덕화
肺成纤维细胞%角化细胞生长因子-1%骨髓基质细胞%真核荧光表达载体
肺成纖維細胞%角化細胞生長因子-1%骨髓基質細胞%真覈熒光錶達載體
폐성섬유세포%각화세포생장인자-1%골수기질세포%진핵형광표체재체
目的 从人胚肺成纤维细胞中克隆人角化细胞生长因子-1(KGF-1)编码区序列,构建真核荧光表达载体.方法 从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,通过反转录 PCR获取KGF-1 cDNA编码区序列,将其与pIRES2-EGFP质粒载体连接,构建重组表达载体pIRES2-EGFP/KGF-1,测序鉴定.将pIRES2-EGFP/KGF-1瞬时转染骨髓基质细胞(marrow stroma cells,MSCs)48 h后,免疫荧光法检测骨髓基质细胞是否存在KGF-1蛋白的表达.结果 构建的重组质粒pIRES2-EGFP/KGF-1经序列分析示与国外文献报道一致.KGF-1免疫荧光法激光共聚焦检测结果证实,pIRES2-EGFP/KGF-1转染骨髓基质细胞后,存在KGF-1蛋白的表达,定位于细胞浆内.结论 成功构建重组真核荧光表达载体pIRES2-EGFP/KGF-1,初步探讨了该基因在骨髓基质细胞中的表达,为其在皮肤组织工程的运用奠定了基础.
目的 從人胚肺成纖維細胞中剋隆人角化細胞生長因子-1(KGF-1)編碼區序列,構建真覈熒光錶達載體.方法 從人胚肺成纖維細胞中提取總RNA,通過反轉錄 PCR穫取KGF-1 cDNA編碼區序列,將其與pIRES2-EGFP質粒載體連接,構建重組錶達載體pIRES2-EGFP/KGF-1,測序鑒定.將pIRES2-EGFP/KGF-1瞬時轉染骨髓基質細胞(marrow stroma cells,MSCs)48 h後,免疫熒光法檢測骨髓基質細胞是否存在KGF-1蛋白的錶達.結果 構建的重組質粒pIRES2-EGFP/KGF-1經序列分析示與國外文獻報道一緻.KGF-1免疫熒光法激光共聚焦檢測結果證實,pIRES2-EGFP/KGF-1轉染骨髓基質細胞後,存在KGF-1蛋白的錶達,定位于細胞漿內.結論 成功構建重組真覈熒光錶達載體pIRES2-EGFP/KGF-1,初步探討瞭該基因在骨髓基質細胞中的錶達,為其在皮膚組織工程的運用奠定瞭基礎.
목적 종인배폐성섬유세포중극륭인각화세포생장인자-1(KGF-1)편마구서렬,구건진핵형광표체재체.방법 종인배폐성섬유세포중제취총RNA,통과반전록 PCR획취KGF-1 cDNA편마구서렬,장기여pIRES2-EGFP질립재체련접,구건중조표체재체pIRES2-EGFP/KGF-1,측서감정.장pIRES2-EGFP/KGF-1순시전염골수기질세포(marrow stroma cells,MSCs)48 h후,면역형광법검측골수기질세포시부존재KGF-1단백적표체.결과 구건적중조질립pIRES2-EGFP/KGF-1경서렬분석시여국외문헌보도일치.KGF-1면역형광법격광공취초검측결과증실,pIRES2-EGFP/KGF-1전염골수기질세포후,존재KGF-1단백적표체,정위우세포장내.결론 성공구건중조진핵형광표체재체pIRES2-EGFP/KGF-1,초보탐토료해기인재골수기질세포중적표체,위기재피부조직공정적운용전정료기출.
