动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2012年
2期
51-54
,共4页
CpG-ODN%Al (OH)3%免疫佐剂%多克隆抗体
CpG-ODN%Al (OH)3%免疫佐劑%多剋隆抗體
CpG-ODN%Al (OH)3%면역좌제%다극륭항체
为了快速制备抗HCMV-gB小鼠多克隆抗体,通过PCR扩增HCMV-gB (57 aa～146 aa)编码序列并克隆到原核表达载体pET21b(+)多克隆位点,用重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta (DE3)并通过IPTG诱导表达,经镍胶亲和层析纯化和透析复性获得重组蛋白.以CpG-ODN和Al(OH)3复合佐剂作为重组蛋白的免疫佐剂,通过0周和3周2次肌肉注射免疫Balb/c小鼠,并在第5周采血分离免疫血清.用ELISA检测免疫血清效价,并通过Western blot检测免疫血清对哺乳动物细胞表达的HCMV-gB1和gB2的反应性.结果显示,本研究制备的免疫血清ELISA滴度达到1∶51 200～1∶102 400,进行Western blot 能够与哺乳动物细胞表达的HCMV-gB1和gB2发生特异性反应.此试验获得了能够用于后续研究工作的抗HCMV-gB小鼠多克隆抗体,本方法具有制备速度快、抗体滴度高和抗原用量少等优点.
為瞭快速製備抗HCMV-gB小鼠多剋隆抗體,通過PCR擴增HCMV-gB (57 aa～146 aa)編碼序列併剋隆到原覈錶達載體pET21b(+)多剋隆位點,用重組質粒轉化大腸埃希菌Rosetta (DE3)併通過IPTG誘導錶達,經鎳膠親和層析純化和透析複性穫得重組蛋白.以CpG-ODN和Al(OH)3複閤佐劑作為重組蛋白的免疫佐劑,通過0週和3週2次肌肉註射免疫Balb/c小鼠,併在第5週採血分離免疫血清.用ELISA檢測免疫血清效價,併通過Western blot檢測免疫血清對哺乳動物細胞錶達的HCMV-gB1和gB2的反應性.結果顯示,本研究製備的免疫血清ELISA滴度達到1∶51 200～1∶102 400,進行Western blot 能夠與哺乳動物細胞錶達的HCMV-gB1和gB2髮生特異性反應.此試驗穫得瞭能夠用于後續研究工作的抗HCMV-gB小鼠多剋隆抗體,本方法具有製備速度快、抗體滴度高和抗原用量少等優點.
위료쾌속제비항HCMV-gB소서다극륭항체,통과PCR확증HCMV-gB (57 aa～146 aa)편마서렬병극륭도원핵표체재체pET21b(+)다극륭위점,용중조질립전화대장애희균Rosetta (DE3)병통과IPTG유도표체,경얼효친화층석순화화투석복성획득중조단백.이CpG-ODN화Al(OH)3복합좌제작위중조단백적면역좌제,통과0주화3주2차기육주사면역Balb/c소서,병재제5주채혈분리면역혈청.용ELISA검측면역혈청효개,병통과Western blot검측면역혈청대포유동물세포표체적HCMV-gB1화gB2적반응성.결과현시,본연구제비적면역혈청ELISA적도체도1∶51 200～1∶102 400,진행Western blot 능구여포유동물세포표체적HCMV-gB1화gB2발생특이성반응.차시험획득료능구용우후속연구공작적항HCMV-gB소서다극륭항체,본방법구유제비속도쾌、항체적도고화항원용량소등우점.
