畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
3期
353-357
,共5页
刘霭莎%李岩%胡文锋%吴同山%李加琪%陈真伟%江冠尧%黎立
劉靄莎%李巖%鬍文鋒%吳同山%李加琪%陳真偉%江冠堯%黎立
류애사%리암%호문봉%오동산%리가기%진진위%강관요%려립
猪%脂联素%球状结构域%乳酸乳球菌
豬%脂聯素%毬狀結構域%乳痠乳毬菌
저%지련소%구상결구역%유산유구균
本研究旨在克隆猪脂联素球状结构域gAd基因,构建重组质粒并将其转化至乳酸乳球菌NZ9000中进行表达,并在体外对重组猪脂联素球状结构域进行生物学活性分析.提取猪脂肪组织总RNA,扩增得到脂联素基因全长并测序,设计引物引入酶切位点和His-tag,把gAd亚克隆到表达载体pNZ8048,将重组质粒转化乳酸乳球菌NZ9000中诱导表达.通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白纯化后再Western blotting检测.然后,将gAd蛋白注射到高糖饲喂的小鼠体内鉴定生物学活性.结果表明成功获得了gAd基因并在乳酸乳球菌NZ000中表达,表达产物相对分子质量约17 ku.经纯化后用Western blotting检验具有反应原性,动物试验证明制备的gAd蛋白能显著降低小鼠的血糖水平.本研究为利用外源重组脂联素球状结构域调节猪的脂肪代谢打下了良好的基础.
本研究旨在剋隆豬脂聯素毬狀結構域gAd基因,構建重組質粒併將其轉化至乳痠乳毬菌NZ9000中進行錶達,併在體外對重組豬脂聯素毬狀結構域進行生物學活性分析.提取豬脂肪組織總RNA,擴增得到脂聯素基因全長併測序,設計引物引入酶切位點和His-tag,把gAd亞剋隆到錶達載體pNZ8048,將重組質粒轉化乳痠乳毬菌NZ9000中誘導錶達.通過Ni2+親和層析柱對重組蛋白純化後再Western blotting檢測.然後,將gAd蛋白註射到高糖飼餵的小鼠體內鑒定生物學活性.結果錶明成功穫得瞭gAd基因併在乳痠乳毬菌NZ000中錶達,錶達產物相對分子質量約17 ku.經純化後用Western blotting檢驗具有反應原性,動物試驗證明製備的gAd蛋白能顯著降低小鼠的血糖水平.本研究為利用外源重組脂聯素毬狀結構域調節豬的脂肪代謝打下瞭良好的基礎.
본연구지재극륭저지련소구상결구역gAd기인,구건중조질립병장기전화지유산유구균NZ9000중진행표체,병재체외대중조저지련소구상결구역진행생물학활성분석.제취저지방조직총RNA,확증득도지련소기인전장병측서,설계인물인입매절위점화His-tag,파gAd아극륭도표체재체pNZ8048,장중조질립전화유산유구균NZ9000중유도표체.통과Ni2+친화층석주대중조단백순화후재Western blotting검측.연후,장gAd단백주사도고당사위적소서체내감정생물학활성.결과표명성공획득료gAd기인병재유산유구균NZ000중표체,표체산물상대분자질량약17 ku.경순화후용Western blotting검험구유반응원성,동물시험증명제비적gAd단백능현저강저소서적혈당수평.본연구위이용외원중조지련소구상결구역조절저적지방대사타하료량호적기출.
