扬州大学学报（农业与生命科学版）
颺州大學學報（農業與生命科學版）
양주대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF YANGZHOU UNIVERSITY(AGRICULTURAL AND LIFE SCIENCE EDITION)
2012年
3期
9-12
,共4页
姜星%生安志%白立景%鞠辉明
薑星%生安誌%白立景%鞠輝明
강성%생안지%백립경%국휘명
大白猪基因组%miRNA-143%microRNA%真核表达载体
大白豬基因組%miRNA-143%microRNA%真覈錶達載體
대백저기인조%miRNA-143%microRNA%진핵표체재체
以大白猪基因组DNA为模板,利用PCR扩增miRNA-143前体序列,构建重组载体pEGP-miR-143,转染猪胎儿成纤维细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,再利用实时荧光定量PCR (QRT- PCR)测定细胞内miRNA-143的表达,以检测外源基因的表达活性；对PCR产物进行测序鉴定及重组载体酶切验证.结果表明:成功构建了pEGP-miR- 143载体；转染细胞后进行荧光观察,载体中GFP有较好的表达活性；QRT-PCR表明,与对照组细胞相比,试验组miRNA-143表达有显著提升,差异极显著(P＜0.01).说明已成功制备miRNA-143过表达载体,为在动物细胞和体内开展miRNA-143相应的功能研究奠定基础.
以大白豬基因組DNA為模闆,利用PCR擴增miRNA-143前體序列,構建重組載體pEGP-miR-143,轉染豬胎兒成纖維細胞,通過熒光觀察轉染效率和報告基因錶達效率,再利用實時熒光定量PCR (QRT- PCR)測定細胞內miRNA-143的錶達,以檢測外源基因的錶達活性；對PCR產物進行測序鑒定及重組載體酶切驗證.結果錶明:成功構建瞭pEGP-miR- 143載體；轉染細胞後進行熒光觀察,載體中GFP有較好的錶達活性；QRT-PCR錶明,與對照組細胞相比,試驗組miRNA-143錶達有顯著提升,差異極顯著(P＜0.01).說明已成功製備miRNA-143過錶達載體,為在動物細胞和體內開展miRNA-143相應的功能研究奠定基礎.
이대백저기인조DNA위모판,이용PCR확증miRNA-143전체서렬,구건중조재체pEGP-miR-143,전염저태인성섬유세포,통과형광관찰전염효솔화보고기인표체효솔,재이용실시형광정량PCR (QRT- PCR)측정세포내miRNA-143적표체,이검측외원기인적표체활성；대PCR산물진행측서감정급중조재체매절험증.결과표명:성공구건료pEGP-miR- 143재체；전염세포후진행형광관찰,재체중GFP유교호적표체활성；QRT-PCR표명,여대조조세포상비,시험조miRNA-143표체유현저제승,차이겁현저(P＜0.01).설명이성공제비miRNA-143과표체재체,위재동물세포화체내개전miRNA-143상응적공능연구전정기출.
