临床儿科杂志
臨床兒科雜誌
림상인과잡지
2012年
10期
981-983
,共3页
王俊%吕凡%邬文杰%王雅杰
王俊%呂凡%鄔文傑%王雅傑
왕준%려범%오문걸%왕아걸
DNA疫苗%血小板源性生长因子β受体%大鼠
DNA疫苗%血小闆源性生長因子β受體%大鼠
DNA역묘%혈소판원성생장인자β수체%대서
目的 克隆鼠血小板源性生长因子β受体 (PDGFR2β) 胞外区基因序列,构建DNA疫苗.方法 TRIzol法 提取SD仔鼠肝脏总RNA,RT-PCR法克隆PDGFR2β胞外区,回收目的 基因,连接至pMDT-18载体,亚克隆法将目标基 因片段连接入真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建DNA疫苗pcDNA3.1(+)-PDGFR2β.脂质体转染COS7细胞,Western- Blot法检测目标基因的表达.结果 PCR扩增长度为1599 bp的PDGFR2β基因胞外区片段,DNA自动测序证明所获基因 片段序列阅读框架正确.将PDGFR2β连接入pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建PDGFR2β胞外区cDNA基因真核表达载 体.疫苗转染COS7细胞,Western-Blot显示细胞中有相对分子质量约50 000的特异蛋白表达.结论 成功构建鼠DNA 疫苗pcDNA3.1(+)-PDGFR2β,并在真核细胞中表达,为进一步研究PDGF/PDGFR-2β通路在肿瘤血管生成中的作用奠 定了基础.
目的 剋隆鼠血小闆源性生長因子β受體 (PDGFR2β) 胞外區基因序列,構建DNA疫苗.方法 TRIzol法 提取SD仔鼠肝髒總RNA,RT-PCR法剋隆PDGFR2β胞外區,迴收目的 基因,連接至pMDT-18載體,亞剋隆法將目標基 因片段連接入真覈錶達質粒pcDNA3.1(+),構建DNA疫苗pcDNA3.1(+)-PDGFR2β.脂質體轉染COS7細胞,Western- Blot法檢測目標基因的錶達.結果 PCR擴增長度為1599 bp的PDGFR2β基因胞外區片段,DNA自動測序證明所穫基因 片段序列閱讀框架正確.將PDGFR2β連接入pcDNA3.1(+)真覈錶達載體,構建PDGFR2β胞外區cDNA基因真覈錶達載 體.疫苗轉染COS7細胞,Western-Blot顯示細胞中有相對分子質量約50 000的特異蛋白錶達.結論 成功構建鼠DNA 疫苗pcDNA3.1(+)-PDGFR2β,併在真覈細胞中錶達,為進一步研究PDGF/PDGFR-2β通路在腫瘤血管生成中的作用奠 定瞭基礎.
목적 극륭서혈소판원성생장인자β수체 (PDGFR2β) 포외구기인서렬,구건DNA역묘.방법 TRIzol법 제취SD자서간장총RNA,RT-PCR법극륭PDGFR2β포외구,회수목적 기인,련접지pMDT-18재체,아극륭법장목표기 인편단련접입진핵표체질립pcDNA3.1(+),구건DNA역묘pcDNA3.1(+)-PDGFR2β.지질체전염COS7세포,Western- Blot법검측목표기인적표체.결과 PCR확증장도위1599 bp적PDGFR2β기인포외구편단,DNA자동측서증명소획기인 편단서렬열독광가정학.장PDGFR2β련접입pcDNA3.1(+)진핵표체재체,구건PDGFR2β포외구cDNA기인진핵표체재 체.역묘전염COS7세포,Western-Blot현시세포중유상대분자질량약50 000적특이단백표체.결론 성공구건서DNA 역묘pcDNA3.1(+)-PDGFR2β,병재진핵세포중표체,위진일보연구PDGF/PDGFR-2β통로재종류혈관생성중적작용전 정료기출.
