第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
11期
1200-1203
,共4页
邱镇%孙颖浩%许传亮%王元天%沈茜%钱松溪%顾正勤%李云%Chinlee Wu
邱鎮%孫穎浩%許傳亮%王元天%瀋茜%錢鬆溪%顧正勤%李雲%Chinlee Wu
구진%손영호%허전량%왕원천%침천%전송계%고정근%리운%Chinlee Wu
前列腺癌%p27kip1%腺病毒载体%PC-3细胞株
前列腺癌%p27kip1%腺病毒載體%PC-3細胞株
전렬선암%p27kip1%선병독재체%PC-3세포주
目的:体外构建人p27kip1可调控性重组腺病毒载体,并观察其在前列腺癌细胞系PC-3细胞中的表达及其对细胞生长的影响.方法:采用Ad-X Tet-Off表达系统,将人全长p27kip1 cDNA经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人p27kip1基因腺病毒(Ad-p27kip1),在HEK293细胞包装、扩增,获得高滴度病毒,采用空斑试验测定病毒滴度,体外转染PC-3细胞,RT-PCR、Western 杂交分别检测目的基因不同水平的表达,并通过MTT法观察转染前后细胞增殖力的变化.Ad-X-TRE-β gal病毒作为对照.结果:构建的Ad-p27kip1病毒滴度为1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western 杂交检测有特异的高表达,转染后对细胞的生长有抑制作用.结论:体外连接法成功地构建携带人p27kip1基因的可调控性重组腺病毒载体,在人前列腺癌细胞系PC-3中有高表达并对细胞生长有抑制作用.
目的:體外構建人p27kip1可調控性重組腺病毒載體,併觀察其在前列腺癌細胞繫PC-3細胞中的錶達及其對細胞生長的影響.方法:採用Ad-X Tet-Off錶達繫統,將人全長p27kip1 cDNA經過穿梭載體,與可調控性腺病毒載體骨架連接,得到重組人p27kip1基因腺病毒(Ad-p27kip1),在HEK293細胞包裝、擴增,穫得高滴度病毒,採用空斑試驗測定病毒滴度,體外轉染PC-3細胞,RT-PCR、Western 雜交分彆檢測目的基因不同水平的錶達,併通過MTT法觀察轉染前後細胞增殖力的變化.Ad-X-TRE-β gal病毒作為對照.結果:構建的Ad-p27kip1病毒滴度為1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western 雜交檢測有特異的高錶達,轉染後對細胞的生長有抑製作用.結論:體外連接法成功地構建攜帶人p27kip1基因的可調控性重組腺病毒載體,在人前列腺癌細胞繫PC-3中有高錶達併對細胞生長有抑製作用.
목적:체외구건인p27kip1가조공성중조선병독재체,병관찰기재전렬선암세포계PC-3세포중적표체급기대세포생장적영향.방법:채용Ad-X Tet-Off표체계통,장인전장p27kip1 cDNA경과천사재체,여가조공성선병독재체골가련접,득도중조인p27kip1기인선병독(Ad-p27kip1),재HEK293세포포장、확증,획득고적도병독,채용공반시험측정병독적도,체외전염PC-3세포,RT-PCR、Western 잡교분별검측목적기인불동수평적표체,병통과MTT법관찰전염전후세포증식력적변화.Ad-X-TRE-β gal병독작위대조.결과:구건적Ad-p27kip1병독적도위1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western 잡교검측유특이적고표체,전염후대세포적생장유억제작용.결론:체외련접법성공지구건휴대인p27kip1기인적가조공성중조선병독재체,재인전렬선암세포계PC-3중유고표체병대세포생장유억제작용.
