第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
8期
673-676
,共4页
黄勇%蒋建利%周筠%姚西英%窦科峰%陈志南
黃勇%蔣建利%週筠%姚西英%竇科峰%陳誌南
황용%장건리%주균%요서영%두과봉%진지남
转染%抗原,肿瘤%HAb18G%成纤维细胞%金属蛋白酶类
轉染%抗原,腫瘤%HAb18G%成纖維細胞%金屬蛋白酶類
전염%항원,종류%HAb18G%성섬유세포%금속단백매류
目的:探讨将HAb18G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/3T3的可行性及其意义.方法:将含有肝癌相关抗原HAb18G全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.0/HAb18G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/3T3,G418筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株t3T3;利用流式细胞仪、间接免疫荧光染色方法鉴定目的蛋白转染情况;RT-PCR琼脂糖电泳、明胶酶谱分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后HAb18G刺激3T3细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的情况.结果:利用脂质体介导法将HAb18G全长cDNA转染入成纤维细胞NIH/3T3,G418筛选,流式细胞仪分析、间接免疫荧光染色证实成功建立了稳定表达HAb18G的阳性克隆株;RT-PCR琼脂糖电泳证实t3T3细胞MMP-2、MMP-9 mRNA转录水平较未转染前增多;明胶酶谱表明t3T3分泌MMPs能力较未转染前增强.结论:HAb18G全长cDNA可以稳定转染成纤维细胞,并能从核酸和蛋白水平诱导基质金属蛋白酶高表达,具有其独特的生物学意义.
目的:探討將HAb18G全長cDNA轉染成纖維細胞NIH/3T3的可行性及其意義.方法:將含有肝癌相關抗原HAb18G全長cDNA的真覈錶達載體pcDNA3.0/HAb18G利用脂質體介導法轉染小鼠成纖維細胞NIH/3T3,G418篩選建立穩定錶達暘性剋隆細胞株t3T3;利用流式細胞儀、間接免疫熒光染色方法鑒定目的蛋白轉染情況;RT-PCR瓊脂糖電泳、明膠酶譜分彆從mRNA和蛋白水平檢測轉染前後HAb18G刺激3T3細胞分泌基質金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的情況.結果:利用脂質體介導法將HAb18G全長cDNA轉染入成纖維細胞NIH/3T3,G418篩選,流式細胞儀分析、間接免疫熒光染色證實成功建立瞭穩定錶達HAb18G的暘性剋隆株;RT-PCR瓊脂糖電泳證實t3T3細胞MMP-2、MMP-9 mRNA轉錄水平較未轉染前增多;明膠酶譜錶明t3T3分泌MMPs能力較未轉染前增彊.結論:HAb18G全長cDNA可以穩定轉染成纖維細胞,併能從覈痠和蛋白水平誘導基質金屬蛋白酶高錶達,具有其獨特的生物學意義.
목적:탐토장HAb18G전장cDNA전염성섬유세포NIH/3T3적가행성급기의의.방법:장함유간암상관항원HAb18G전장cDNA적진핵표체재체pcDNA3.0/HAb18G이용지질체개도법전염소서성섬유세포NIH/3T3,G418사선건립은정표체양성극륭세포주t3T3;이용류식세포의、간접면역형광염색방법감정목적단백전염정황;RT-PCR경지당전영、명효매보분별종mRNA화단백수평검측전염전후HAb18G자격3T3세포분비기질금속단백매(MMP-2、MMP-9)적정황.결과:이용지질체개도법장HAb18G전장cDNA전염입성섬유세포NIH/3T3,G418사선,류식세포의분석、간접면역형광염색증실성공건립료은정표체HAb18G적양성극륭주;RT-PCR경지당전영증실t3T3세포MMP-2、MMP-9 mRNA전록수평교미전염전증다;명효매보표명t3T3분비MMPs능력교미전염전증강.결론:HAb18G전장cDNA가이은정전염성섬유세포,병능종핵산화단백수평유도기질금속단백매고표체,구유기독특적생물학의의.
