现代口腔医学杂志
現代口腔醫學雜誌
현대구강의학잡지
JOURNAL OF MODERN STOMATOLOGY
2005年
3期
266-269
,共4页
郭丽宏%史俊南%肖晓蓉%朱硃
郭麗宏%史俊南%肖曉蓉%硃硃
곽려굉%사준남%초효용%주주
变形链球菌%致龋%克隆%差异筛选
變形鏈毬菌%緻齲%剋隆%差異篩選
변형련구균%치우%극륭%차이사선
目的筛选含致龋相关基因/DNA片段的阳性克隆,为探究变形链球菌致龋的分子机制奠定基础.方法将抑制消减杂交方法获得的高毒力株特异的消减PCR产物与T/A载体pCR2.1连接,将连接产物转化E.coli TOP10F′感受态细胞,进行蓝白筛选.对96个转化子进行Colony PCR,将PCR产物点样于同一尼龙膜上,分别与地高辛标记的变形链球菌高、低毒力株基因组DNA/AluI酶切产物杂交,高通量筛选阳性克隆.结果随机挑取了96个白色或白色中央有蓝色的菌落,经过Colony PCR,其中有1个转化子的扩增产物为双带,其余均为0.2～2kb之间的单一条带.经过杂交,以与高毒力株基因组有杂交信号,而与低毒力株基因组无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆,筛选的阳性率为50%左右,阳性克隆中含有c血清型变形链球菌致龋相关的基因/片段.结论对抑制消减杂交方法获得的变形链球菌高毒力株特异的消减PCR产物进行批量克隆和高通量筛选,获得了致龋相关的基因/DNA片段.
目的篩選含緻齲相關基因/DNA片段的暘性剋隆,為探究變形鏈毬菌緻齲的分子機製奠定基礎.方法將抑製消減雜交方法穫得的高毒力株特異的消減PCR產物與T/A載體pCR2.1連接,將連接產物轉化E.coli TOP10F′感受態細胞,進行藍白篩選.對96箇轉化子進行Colony PCR,將PCR產物點樣于同一尼龍膜上,分彆與地高辛標記的變形鏈毬菌高、低毒力株基因組DNA/AluI酶切產物雜交,高通量篩選暘性剋隆.結果隨機挑取瞭96箇白色或白色中央有藍色的菌落,經過Colony PCR,其中有1箇轉化子的擴增產物為雙帶,其餘均為0.2～2kb之間的單一條帶.經過雜交,以與高毒力株基因組有雜交信號,而與低毒力株基因組無雜交信號或信號明顯弱的轉化子為暘性剋隆,篩選的暘性率為50%左右,暘性剋隆中含有c血清型變形鏈毬菌緻齲相關的基因/片段.結論對抑製消減雜交方法穫得的變形鏈毬菌高毒力株特異的消減PCR產物進行批量剋隆和高通量篩選,穫得瞭緻齲相關的基因/DNA片段.
목적사선함치우상관기인/DNA편단적양성극륭,위탐구변형련구균치우적분자궤제전정기출.방법장억제소감잡교방법획득적고독력주특이적소감PCR산물여T/A재체pCR2.1련접,장련접산물전화E.coli TOP10F′감수태세포,진행람백사선.대96개전화자진행Colony PCR,장PCR산물점양우동일니룡막상,분별여지고신표기적변형련구균고、저독력주기인조DNA/AluI매절산물잡교,고통량사선양성극륭.결과수궤도취료96개백색혹백색중앙유람색적균락,경과Colony PCR,기중유1개전화자적확증산물위쌍대,기여균위0.2～2kb지간적단일조대.경과잡교,이여고독력주기인조유잡교신호,이여저독력주기인조무잡교신호혹신호명현약적전화자위양성극륭,사선적양성솔위50%좌우,양성극륭중함유c혈청형변형련구균치우상관적기인/편단.결론대억제소감잡교방법획득적변형련구균고독력주특이적소감PCR산물진행비량극륭화고통량사선,획득료치우상관적기인/DNA편단.
