CAJ | 학술논문

目的:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达hCGβ-(CTP)4、hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4融合蛋白,并对蛋白进行分离纯化.方法:将Pbsmr-(CTP)4中的(CTP)4基因片断克隆入表达载体Pet-28a(+),得到表达质粒Pet-28a(+)-(CTP)4.将PCR获得的补体C3d-P28 DNA序列以头尾串连的方式构建四聚体.将(C3d-P28)4基因片断克隆入Pbsmr-(CTP)4,得到Pbsmr-(CTP)4-(C3d-P28)4,进一步得到表达质粒Pet-28a(+)-(CTP)4-(C3d-P28)4.将表达质粒Pet-28a(+)-(CTP)4和pET-28a(+)-(CTP)4-(C3d-P28)4分别转化入大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白hCCβ-(CTP)4和hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4.采用Ni-NTA-resin和凝胶过滤方法纯化蛋白.结果:菌株经IPTG诱导后检测到目的基因的表达产物,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白的分子量分别为27 kD和40 kD左右.结论:在BL21(DE3)中成功表达了hCGβ-(CTP)4和hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4融合蛋白,并确立了纯化方法,为进一步研究其免疫原性和应用于抗肿瘤疫苗奠定了基础.
목적:재대장간균BL21(DE3)중표체hCGβ-(CTP)4、hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4융합단백,병대단백진행분리순화.방법:장Pbsmr-(CTP)4중적(CTP)4기인편단극륭입표체재체Pet-28a(+),득도표체질립Pet-28a(+)-(CTP)4.장PCR획득적보체C3d-P28 DNA서렬이두미천련적방식구건사취체.장(C3d-P28)4기인편단극륭입Pbsmr-(CTP)4,득도Pbsmr-(CTP)4-(C3d-P28)4,진일보득도표체질립Pet-28a(+)-(CTP)4-(C3d-P28)4.장표체질립Pet-28a(+)-(CTP)4화pET-28a(+)-(CTP)4-(C3d-P28)4분별전화입대장간균BL21(DE3),표체융합단백hCCβ-(CTP)4화hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4.채용Ni-NTA-resin화응효과려방법순화단백.결과:균주경IPTG유도후검측도목적기인적표체산물,SDS-PAGE화Western blot결과현시융합단백적분자량분별위27 kD화40 kD좌우.결론:재BL21(DE3)중성공표체료hCGβ-(CTP)4화hCGβ-(CTP)4-(C3d-P28)4융합단백,병학립료순화방법,위진일보연구기면역원성화응용우항종류역묘전정료기출.