首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2009年
3期
326-330
,共5页
张育先%白启轩%马超%马红
張育先%白啟軒%馬超%馬紅
장육선%백계헌%마초%마홍
脂联素%肝纤维化%人肝星状细胞系
脂聯素%肝纖維化%人肝星狀細胞繫
지련소%간섬유화%인간성상세포계
目的 构建人全长脂联素真核表达质粒,转染人肝星状细胞系(LX-2),观察其表达及分泌情况,为脂联素在肝纤维化作用的基础及临床研究提供实验数据.方法 提取人脂肪组织mRNA,用RT-PCR扩增出添加酶切位点的人全长脂联素基因片段,双酶切扩增出的目的 基因片段及空载体质粒P7,将酶切后的片段进行连接、转化构建质粒.用FuGENE HD将构建成功的质粒转染LX-2细胞,用免疫荧光观察其转染效率及细胞定位,Western blotting检测脂联素蛋白表达.结果 酶切及测序证实成功构建人全长脂联素真核表达质粒,免疫荧光检测转染效率约为40%,Western blotting检测到30 000处存在目的 蛋白表达,与预期相对分子质量一致.结论 成功构建的人全长脂联素真核表达质粒能有效转染LX-2细胞及表达脂联素蛋白.
目的 構建人全長脂聯素真覈錶達質粒,轉染人肝星狀細胞繫(LX-2),觀察其錶達及分泌情況,為脂聯素在肝纖維化作用的基礎及臨床研究提供實驗數據.方法 提取人脂肪組織mRNA,用RT-PCR擴增齣添加酶切位點的人全長脂聯素基因片段,雙酶切擴增齣的目的 基因片段及空載體質粒P7,將酶切後的片段進行連接、轉化構建質粒.用FuGENE HD將構建成功的質粒轉染LX-2細胞,用免疫熒光觀察其轉染效率及細胞定位,Western blotting檢測脂聯素蛋白錶達.結果 酶切及測序證實成功構建人全長脂聯素真覈錶達質粒,免疫熒光檢測轉染效率約為40%,Western blotting檢測到30 000處存在目的 蛋白錶達,與預期相對分子質量一緻.結論 成功構建的人全長脂聯素真覈錶達質粒能有效轉染LX-2細胞及錶達脂聯素蛋白.
목적 구건인전장지련소진핵표체질립,전염인간성상세포계(LX-2),관찰기표체급분비정황,위지련소재간섬유화작용적기출급림상연구제공실험수거.방법 제취인지방조직mRNA,용RT-PCR확증출첨가매절위점적인전장지련소기인편단,쌍매절확증출적목적 기인편단급공재체질립P7,장매절후적편단진행련접、전화구건질립.용FuGENE HD장구건성공적질립전염LX-2세포,용면역형광관찰기전염효솔급세포정위,Western blotting검측지련소단백표체.결과 매절급측서증실성공구건인전장지련소진핵표체질립,면역형광검측전염효솔약위40%,Western blotting검측도30 000처존재목적 단백표체,여예기상대분자질량일치.결론 성공구건적인전장지련소진핵표체질립능유효전염LX-2세포급표체지련소단백.
