CAJ | 학술논문

背景:目前普遍认为骨髓间充质干细胞是一类高度黏附的成纤维样细胞,但也有研究显示处于非黏附状态的骨髓间质细胞也具有自我复制及多向分化潜能.目的:探讨表皮生长因子对骨髓中存在的非黏附骨髓间充质干细胞产生成纤维细胞集落形成单位的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-07/12在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成.材料:4周龄雄性C57/BL6小鼠6只,由南京医科大学实验动物中心提供.表皮生长因子为美国Sigma公司产品.方法:全骨髓法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞浓度为2×109L-1.收集第3代细胞,分别接种于向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的培养液中进行诱导.取30 mL骨髓间充质干细胞悬液,平均分到两管中,表皮生长因子处理组加入终浓度为10 μg/L表皮生长因子,空白对照组加入普通完全培养基,采用反复转移非黏附骨髓细胞培养法,每天将非黏附骨髓细胞转移到新的培养皿,原来的皿中为总骨髓来源的贴壁细胞,转移第1次定义PO1,第2次为PO2,依次类推,培养12 d终止.主要观察指标:骨髓间充质干细胞的鉴定结果,亚甲基蓝染色显示每皿细胞克隆的形成情况,计算克隆形成区域占皿底面积的百分比及克隆数目.结果:非黏附骨髓间充质细胞在第4天转移到新的培养皿后,继续培养仍能够贴壁生长,并逐渐扩增形成克隆;诱导后能够分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞.给予表皮生长因子处理后,无论是总骨髓来源的贴壁细胞,还是反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞,均能够不断产生成纤维细胞集落形成单位,且数量明显多于空白对照组(P<0.05).表皮生长因子处理组总骨髓来源的贴壁细胞、PO1-PO5非黏附骨髓间充质干细胞所形成的贴壁细胞数分别是空白对照组的1.54倍,4.25倍,2.51倍,1.56倍,1.25倍,2.01倍:所产生的克隆数分别是空白对照组的1.2倍,1.8倍,1.4倍,1.4倍,1.1倍.结论:表皮生长因子能有效促进骨髓中的非黏附骨髓间充质干细胞在悬浮状态下增殖,明显提高了骨髓间充质干细胞的富集效率. 揹景:目前普遍認為骨髓間充質榦細胞是一類高度黏附的成纖維樣細胞,但也有研究顯示處于非黏附狀態的骨髓間質細胞也具有自我複製及多嚮分化潛能.目的:探討錶皮生長因子對骨髓中存在的非黏附骨髓間充質榦細胞產生成纖維細胞集落形成單位的影響.設計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2007-07/12在南京醫科大學骨與榦細胞研究中心完成.材料:4週齡雄性C57/BL6小鼠6隻,由南京醫科大學實驗動物中心提供.錶皮生長因子為美國Sigma公司產品.方法:全骨髓法體外分離培養小鼠骨髓間充質榦細胞,調整細胞濃度為2×109L-1.收集第3代細胞,分彆接種于嚮脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞分化的培養液中進行誘導.取30 mL骨髓間充質榦細胞懸液,平均分到兩管中,錶皮生長因子處理組加入終濃度為10 μg/L錶皮生長因子,空白對照組加入普通完全培養基,採用反複轉移非黏附骨髓細胞培養法,每天將非黏附骨髓細胞轉移到新的培養皿,原來的皿中為總骨髓來源的貼壁細胞,轉移第1次定義PO1,第2次為PO2,依次類推,培養12 d終止.主要觀察指標:骨髓間充質榦細胞的鑒定結果,亞甲基藍染色顯示每皿細胞剋隆的形成情況,計算剋隆形成區域佔皿底麵積的百分比及剋隆數目.結果:非黏附骨髓間充質細胞在第4天轉移到新的培養皿後,繼續培養仍能夠貼壁生長,併逐漸擴增形成剋隆;誘導後能夠分化為脂肪細胞、成骨細胞和軟骨細胞.給予錶皮生長因子處理後,無論是總骨髓來源的貼壁細胞,還是反複轉移的非黏附骨髓間充質榦細胞,均能夠不斷產生成纖維細胞集落形成單位,且數量明顯多于空白對照組(P<0.05).錶皮生長因子處理組總骨髓來源的貼壁細胞、PO1-PO5非黏附骨髓間充質榦細胞所形成的貼壁細胞數分彆是空白對照組的1.54倍,4.25倍,2.51倍,1.56倍,1.25倍,2.01倍:所產生的剋隆數分彆是空白對照組的1.2倍,1.8倍,1.4倍,1.4倍,1.1倍.結論:錶皮生長因子能有效促進骨髓中的非黏附骨髓間充質榦細胞在懸浮狀態下增殖,明顯提高瞭骨髓間充質榦細胞的富集效率.
배경:목전보편인위골수간충질간세포시일류고도점부적성섬유양세포,단야유연구현시처우비점부상태적골수간질세포야구유자아복제급다향분화잠능.목적:탐토표피생장인자대골수중존재적비점부골수간충질간세포산생성섬유세포집락형성단위적영향.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-07/12재남경의과대학골여간세포연구중심완성.재료:4주령웅성C57/BL6소서6지,유남경의과대학실험동물중심제공.표피생장인자위미국Sigma공사산품.방법:전골수법체외분리배양소서골수간충질간세포,조정세포농도위2×109L-1.수집제3대세포,분별접충우향지방세포、성골세포、연골세포분화적배양액중진행유도.취30 mL골수간충질간세포현액,평균분도량관중,표피생장인자처리조가입종농도위10 μg/L표피생장인자,공백대조조가입보통완전배양기,채용반복전이비점부골수세포배양법,매천장비점부골수세포전이도신적배양명,원래적명중위총골수래원적첩벽세포,전이제1차정의PO1,제2차위PO2,의차유추,배양12 d종지.주요관찰지표:골수간충질간세포적감정결과,아갑기람염색현시매명세포극륭적형성정황,계산극륭형성구역점명저면적적백분비급극륭수목.결과:비점부골수간충질세포재제4천전이도신적배양명후,계속배양잉능구첩벽생장,병축점확증형성극륭;유도후능구분화위지방세포、성골세포화연골세포.급여표피생장인자처리후,무론시총골수래원적첩벽세포,환시반복전이적비점부골수간충질간세포,균능구불단산생성섬유세포집락형성단위,차수량명현다우공백대조조(P<0.05).표피생장인자처리조총골수래원적첩벽세포、PO1-PO5비점부골수간충질간세포소형성적첩벽세포수분별시공백대조조적1.54배,4.25배,2.51배,1.56배,1.25배,2.01배:소산생적극륭수분별시공백대조조적1.2배,1.8배,1.4배,1.4배,1.1배.결론:표피생장인자능유효촉진골수중적비점부골수간충질간세포재현부상태하증식,명현제고료골수간충질간세포적부집효솔.