江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2010年
5期
373-376,381
,共5页
肺癌%基因治疗%生存素%启动子%单纯疱疹病毒1型胸苷激酶
肺癌%基因治療%生存素%啟動子%單純皰疹病毒1型胸苷激酶
폐암%기인치료%생존소%계동자%단순포진병독1형흉감격매
目的:构建生存素(survivin,SURV)启动子调控的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-TK)基因表达载体,检测该启动子的活性和特异性,观察该基因对大鼠体内肺癌生长的抑制功能. 方法:酶切回收SURV启动子、CMV启动子;PCR扩增HSV1-TK基因;将上述片段与含有报告基因荧光素酶基因(Luciferase,Luc)的载体pGL3-Basic的多克隆位点连接,分别构建成为SURV、CMV启动子调控的HSV1-TK、Luc真核表达载体(pSURV-TK、pCMV-TK,pSURV-Luc、pCMV-Luc),用脂质体法将表达载体转染A549细胞系,蛋白质印迹法检测TK基因的表达,更昔洛韦细胞毒实验观察TK蛋白的酶活性,肿瘤生长抑制实验证实pSURV-TK的抑瘤功能. 结果:成功地将SURV基因启动子、CMV启动子,HSV1-TK克隆到报告基因载体pGL3 的多克隆位点,酶切鉴定和DNA 序列分析无误, 蛋白质印迹证实pSURV-TK在肺癌细胞A549中可特异性表达出TK蛋白,更昔洛韦细胞毒实验表明表达的TK蛋白具有酶活性,并可有效抑制体内肺癌的生长. 结论:SURV启动子调控的TK基因治疗载体,可特异性调控TK基因在A594肺癌细胞的表达并抑制肺癌细胞的生长,为应用自杀基因治疗肺癌提供了新的途径.
目的:構建生存素(survivin,SURV)啟動子調控的單純皰疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-TK)基因錶達載體,檢測該啟動子的活性和特異性,觀察該基因對大鼠體內肺癌生長的抑製功能. 方法:酶切迴收SURV啟動子、CMV啟動子;PCR擴增HSV1-TK基因;將上述片段與含有報告基因熒光素酶基因(Luciferase,Luc)的載體pGL3-Basic的多剋隆位點連接,分彆構建成為SURV、CMV啟動子調控的HSV1-TK、Luc真覈錶達載體(pSURV-TK、pCMV-TK,pSURV-Luc、pCMV-Luc),用脂質體法將錶達載體轉染A549細胞繫,蛋白質印跡法檢測TK基因的錶達,更昔洛韋細胞毒實驗觀察TK蛋白的酶活性,腫瘤生長抑製實驗證實pSURV-TK的抑瘤功能. 結果:成功地將SURV基因啟動子、CMV啟動子,HSV1-TK剋隆到報告基因載體pGL3 的多剋隆位點,酶切鑒定和DNA 序列分析無誤, 蛋白質印跡證實pSURV-TK在肺癌細胞A549中可特異性錶達齣TK蛋白,更昔洛韋細胞毒實驗錶明錶達的TK蛋白具有酶活性,併可有效抑製體內肺癌的生長. 結論:SURV啟動子調控的TK基因治療載體,可特異性調控TK基因在A594肺癌細胞的錶達併抑製肺癌細胞的生長,為應用自殺基因治療肺癌提供瞭新的途徑.
목적:구건생존소(survivin,SURV)계동자조공적단순포진병독1형흉감격매(HSV1-TK)기인표체재체,검측해계동자적활성화특이성,관찰해기인대대서체내폐암생장적억제공능. 방법:매절회수SURV계동자、CMV계동자;PCR확증HSV1-TK기인;장상술편단여함유보고기인형광소매기인(Luciferase,Luc)적재체pGL3-Basic적다극륭위점련접,분별구건성위SURV、CMV계동자조공적HSV1-TK、Luc진핵표체재체(pSURV-TK、pCMV-TK,pSURV-Luc、pCMV-Luc),용지질체법장표체재체전염A549세포계,단백질인적법검측TK기인적표체,경석락위세포독실험관찰TK단백적매활성,종류생장억제실험증실pSURV-TK적억류공능. 결과:성공지장SURV기인계동자、CMV계동자,HSV1-TK극륭도보고기인재체pGL3 적다극륭위점,매절감정화DNA 서렬분석무오, 단백질인적증실pSURV-TK재폐암세포A549중가특이성표체출TK단백,경석락위세포독실험표명표체적TK단백구유매활성,병가유효억제체내폐암적생장. 결론:SURV계동자조공적TK기인치료재체,가특이성조공TK기인재A594폐암세포적표체병억제폐암세포적생장,위응용자살기인치료폐암제공료신적도경.
