中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
2期
241-244
,共4页
孟步亮%徐丹%刘佳%李力燕%王廷华
孟步亮%徐丹%劉佳%李力燕%王廷華
맹보량%서단%류가%리력연%왕정화
脑源性神经营养因子%真核表达载体%重组质粒%克隆%基因表达
腦源性神經營養因子%真覈錶達載體%重組質粒%剋隆%基因錶達
뇌원성신경영양인자%진핵표체재체%중조질립%극륭%기인표체
背景:脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作用广泛,但属于生物大分子,不能通过血脑屏障.基因治疗是目前解决脑源性神经营养因子给药途径最有希望的方案.目的:拟构建大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体.方法:采用反转录聚合酶链式反应技术从SD 大鼠脑组织提取总RNA,扩增脑源性神经营养因子基因cDNA 序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3 中,分别取10 g 质粒pcDNA3 和纯化的目的基因分别进行EcoR Ⅰ、xho Ⅰ双酶切.将目的基因片段和pcDNA3 载体连接,转入感受态DH5α细胞中,经酶切鉴定后送上海博亚生物技术有限公司测序.结果与结论:RT-PCR 产物为749 bp 的特异片段,重组质粒pcDNA3/BDNF 酶切后产生749 bp 和5 446 bp 的片段,DNA测序证实749 bp 片段的碱基序列与大鼠脑源性神经营养因子基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/BDNF 重组质粒.
揹景:腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作用廣汎,但屬于生物大分子,不能通過血腦屏障.基因治療是目前解決腦源性神經營養因子給藥途徑最有希望的方案.目的:擬構建大鼠腦源性神經營養因子基因真覈錶達載體.方法:採用反轉錄聚閤酶鏈式反應技術從SD 大鼠腦組織提取總RNA,擴增腦源性神經營養因子基因cDNA 序列,併將其剋隆到真覈錶達載體pcDNA3 中,分彆取10 g 質粒pcDNA3 和純化的目的基因分彆進行EcoR Ⅰ、xho Ⅰ雙酶切.將目的基因片段和pcDNA3 載體連接,轉入感受態DH5α細胞中,經酶切鑒定後送上海博亞生物技術有限公司測序.結果與結論:RT-PCR 產物為749 bp 的特異片段,重組質粒pcDNA3/BDNF 酶切後產生749 bp 和5 446 bp 的片段,DNA測序證實749 bp 片段的堿基序列與大鼠腦源性神經營養因子基因序列完全一緻,成功構建瞭pcDNA3/BDNF 重組質粒.
배경:뇌원성신경영양인자(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)작용엄범,단속우생물대분자,불능통과혈뇌병장.기인치료시목전해결뇌원성신경영양인자급약도경최유희망적방안.목적:의구건대서뇌원성신경영양인자기인진핵표체재체.방법:채용반전록취합매련식반응기술종SD 대서뇌조직제취총RNA,확증뇌원성신경영양인자기인cDNA 서렬,병장기극륭도진핵표체재체pcDNA3 중,분별취10 g 질립pcDNA3 화순화적목적기인분별진행EcoR Ⅰ、xho Ⅰ쌍매절.장목적기인편단화pcDNA3 재체련접,전입감수태DH5α세포중,경매절감정후송상해박아생물기술유한공사측서.결과여결론:RT-PCR 산물위749 bp 적특이편단,중조질립pcDNA3/BDNF 매절후산생749 bp 화5 446 bp 적편단,DNA측서증실749 bp 편단적감기서렬여대서뇌원성신경영양인자기인서렬완전일치,성공구건료pcDNA3/BDNF 중조질립.
