江苏大学学报(医学版)
江囌大學學報(醫學版)
강소대학학보(의학판)
ACADEMIC JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY(MEDICINE)
2011年
3期
224-228
,共5页
徐君%张园海%申悦平%李晶
徐君%張園海%申悅平%李晶
서군%장완해%신열평%리정
乙型肝炎病毒%基本核心启动子%突变%质粒
乙型肝炎病毒%基本覈心啟動子%突變%質粒
을형간염병독%기본핵심계동자%돌변%질립
目的:构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基本核心启动子(base core promoter,BCP)区A1762T/G1764A双突变株的复制质粒.方法:以1.5拷贝HBV野生型全基因组序列质粒(pHBV1.5,C型)为模板,采用分子克隆、大引物PCR定点诱导突变和遗传检测法等技术,筛选出阳性克隆,提取突变质粒,经DNA测序鉴定质粒序列的正确性.将突变质粒转染到人肝癌HepG2.0细胞,测定细胞培养液HBV DNA载量和HBsAg水平来鉴定突变质粒的复制能力.结果:成功构建BCP区A1762T/G1764A双突变复制质粒,经转染人肝癌HepG2.0细胞培养后测定HBV DNA水平,双突变株复制能力高于野生株[分别为(3.29±1.27)×105拷贝/ml和(1.24±0.24)×105拷贝/ml,P =0.01].结论:获得BCP区A1762T/G1764A双突变株质粒,为进一步研究启动子转录活性等基础性研究提供了基本模型.
目的:構建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基本覈心啟動子(base core promoter,BCP)區A1762T/G1764A雙突變株的複製質粒.方法:以1.5拷貝HBV野生型全基因組序列質粒(pHBV1.5,C型)為模闆,採用分子剋隆、大引物PCR定點誘導突變和遺傳檢測法等技術,篩選齣暘性剋隆,提取突變質粒,經DNA測序鑒定質粒序列的正確性.將突變質粒轉染到人肝癌HepG2.0細胞,測定細胞培養液HBV DNA載量和HBsAg水平來鑒定突變質粒的複製能力.結果:成功構建BCP區A1762T/G1764A雙突變複製質粒,經轉染人肝癌HepG2.0細胞培養後測定HBV DNA水平,雙突變株複製能力高于野生株[分彆為(3.29±1.27)×105拷貝/ml和(1.24±0.24)×105拷貝/ml,P =0.01].結論:穫得BCP區A1762T/G1764A雙突變株質粒,為進一步研究啟動子轉錄活性等基礎性研究提供瞭基本模型.
목적:구건을형간염병독(hepatitis B virus,HBV)기본핵심계동자(base core promoter,BCP)구A1762T/G1764A쌍돌변주적복제질립.방법:이1.5고패HBV야생형전기인조서렬질립(pHBV1.5,C형)위모판,채용분자극륭、대인물PCR정점유도돌변화유전검측법등기술,사선출양성극륭,제취돌변질립,경DNA측서감정질립서렬적정학성.장돌변질립전염도인간암HepG2.0세포,측정세포배양액HBV DNA재량화HBsAg수평래감정돌변질립적복제능력.결과:성공구건BCP구A1762T/G1764A쌍돌변복제질립,경전염인간암HepG2.0세포배양후측정HBV DNA수평,쌍돌변주복제능력고우야생주[분별위(3.29±1.27)×105고패/ml화(1.24±0.24)×105고패/ml,P =0.01].결론:획득BCP구A1762T/G1764A쌍돌변주질립,위진일보연구계동자전록활성등기출성연구제공료기본모형.
