解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2012年
1期
30-32,36
,共4页
张喜梅%张宝东%郭铁云%闫晓飞%陈雅隽%雷蕾%金连弘
張喜梅%張寶東%郭鐵雲%閆曉飛%陳雅雋%雷蕾%金連弘
장희매%장보동%곽철운%염효비%진아준%뢰뢰%금련홍
成纤维细胞%重编程%甲基化%表观遗传学%神经细胞
成纖維細胞%重編程%甲基化%錶觀遺傳學%神經細胞
성섬유세포%중편정%갑기화%표관유전학%신경세포
目的 通过联合应用表观修饰药物5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)和曲古抑菌素A(Trichstatin A,TSA)对NIH/3T3细胞进行重编程,应用β-羟基酸(beta hydroxy acid,BHA)和β-巯基乙醇(β -mercaptoethanol,β-ME)进一步诱导,以期表达与神经细胞密切相关的基因.方法 应用流式细胞技术检测实验组(4.5 μM 5-aza-dC+0.35μMTSA+1mMβ -ME+200 μM BHA作用后的NIH/3T3细胞)和对照组中NIH/3T3细胞的DNA甲基化水平.应用RT-PCR的方法检测Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4的表达,免疫细胞化学染色检测巢蛋白(nestin)和神经丝轻链(neurofilament light chain,NF-L)的表达情况.结果 实验组NIH/3T3细胞DNA甲基化水平较对照组明显降低,细胞均呈现出Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4基因的阳性表达.经过BHA和β-ME诱导后,NIH/3T3细胞呈巢蛋白和神经丝轻链阳性.结论 表观修饰后的细胞经诱导后可以呈现nestin和NFL的阳性表达.
目的 通過聯閤應用錶觀脩飾藥物5-氮-2'-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)和麯古抑菌素A(Trichstatin A,TSA)對NIH/3T3細胞進行重編程,應用β-羥基痠(beta hydroxy acid,BHA)和β-巰基乙醇(β -mercaptoethanol,β-ME)進一步誘導,以期錶達與神經細胞密切相關的基因.方法 應用流式細胞技術檢測實驗組(4.5 μM 5-aza-dC+0.35μMTSA+1mMβ -ME+200 μM BHA作用後的NIH/3T3細胞)和對照組中NIH/3T3細胞的DNA甲基化水平.應用RT-PCR的方法檢測Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4的錶達,免疫細胞化學染色檢測巢蛋白(nestin)和神經絲輕鏈(neurofilament light chain,NF-L)的錶達情況.結果 實驗組NIH/3T3細胞DNA甲基化水平較對照組明顯降低,細胞均呈現齣Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4基因的暘性錶達.經過BHA和β-ME誘導後,NIH/3T3細胞呈巢蛋白和神經絲輕鏈暘性.結論 錶觀脩飾後的細胞經誘導後可以呈現nestin和NFL的暘性錶達.
목적 통과연합응용표관수식약물5-담-2'-탈양포감(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)화곡고억균소A(Trichstatin A,TSA)대NIH/3T3세포진행중편정,응용β-간기산(beta hydroxy acid,BHA)화β-구기을순(β -mercaptoethanol,β-ME)진일보유도,이기표체여신경세포밀절상관적기인.방법 응용류식세포기술검측실험조(4.5 μM 5-aza-dC+0.35μMTSA+1mMβ -ME+200 μM BHA작용후적NIH/3T3세포)화대조조중NIH/3T3세포적DNA갑기화수평.응용RT-PCR적방법검측Oct4,Sox2,c-Myc화Klf4적표체,면역세포화학염색검측소단백(nestin)화신경사경련(neurofilament light chain,NF-L)적표체정황.결과 실험조NIH/3T3세포DNA갑기화수평교대조조명현강저,세포균정현출Oct4,Sox2,c-Myc화Klf4기인적양성표체.경과BHA화β-ME유도후,NIH/3T3세포정소단백화신경사경련양성.결론 표관수식후적세포경유도후가이정현nestin화NFL적양성표체.
