临床和实验医学杂志
臨床和實驗醫學雜誌
림상화실험의학잡지
JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINE
2012年
7期
484-486,封3
,共4页
薛净%李瑜元%聂玉强%沙卫红%张亚历%周殿元
薛淨%李瑜元%聶玉彊%沙衛紅%張亞歷%週殿元
설정%리유원%섭옥강%사위홍%장아력%주전원
Survivin基因%HepG2细胞%小干扰RNA%基因表达%检测
Survivin基因%HepG2細胞%小榦擾RNA%基因錶達%檢測
Survivin기인%HepG2세포%소간우RNA%기인표체%검측
目的 构建Survivin 基因特异性小干扰RNA(siRNA),检测siRNA-Survivin对Survivin基因表达的抑制,在人肝癌细胞株HepG2中研究 survivin和 survivin siRNA 对细胞凋亡的影响.方法 设计survivin siRNA序列,构建靶向 Survivin siRNA 真核载体.利用脂质体转染人肝癌HepG2细胞,通过相差显微镜下观察、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转染后survivin的表达,以及HepG2细胞的凋亡.结果 成功构建了survivin siRNA表达载体,并且si-survivin对survivin有明显抑制效应,可显著抑制HepG2细胞的发生凋亡.转染Survivin-siRNA 细胞活性受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,DNA电泳出现典型的凋亡"梯状"带.RT-PCR 结果显示细胞转染24 h、48 h和72 h 后HepG2 Survivin mRNA 分别减少了56%、78%和50%,而siRNA 阴性对照与未转染细胞相比差异不显著.结论 转染的Survivin-siRNA 可特异性抑制肝癌细胞株HepG2凋亡抑制基因的表达,从而为肿瘤的基因治疗提供新的实验基础.
目的 構建Survivin 基因特異性小榦擾RNA(siRNA),檢測siRNA-Survivin對Survivin基因錶達的抑製,在人肝癌細胞株HepG2中研究 survivin和 survivin siRNA 對細胞凋亡的影響.方法 設計survivin siRNA序列,構建靶嚮 Survivin siRNA 真覈載體.利用脂質體轉染人肝癌HepG2細胞,通過相差顯微鏡下觀察、四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT法)及反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)觀察轉染後survivin的錶達,以及HepG2細胞的凋亡.結果 成功構建瞭survivin siRNA錶達載體,併且si-survivin對survivin有明顯抑製效應,可顯著抑製HepG2細胞的髮生凋亡.轉染Survivin-siRNA 細胞活性受到顯著抑製(P<0.05),光鏡下齣現明顯的凋亡形態,DNA電泳齣現典型的凋亡"梯狀"帶.RT-PCR 結果顯示細胞轉染24 h、48 h和72 h 後HepG2 Survivin mRNA 分彆減少瞭56%、78%和50%,而siRNA 陰性對照與未轉染細胞相比差異不顯著.結論 轉染的Survivin-siRNA 可特異性抑製肝癌細胞株HepG2凋亡抑製基因的錶達,從而為腫瘤的基因治療提供新的實驗基礎.
목적 구건Survivin 기인특이성소간우RNA(siRNA),검측siRNA-Survivin대Survivin기인표체적억제,재인간암세포주HepG2중연구 survivin화 survivin siRNA 대세포조망적영향.방법 설계survivin siRNA서렬,구건파향 Survivin siRNA 진핵재체.이용지질체전염인간암HepG2세포,통과상차현미경하관찰、사갑기우담서염미량매반응비색법(MTT법)급반전록-취합매련반응(RT-PCR)관찰전염후survivin적표체,이급HepG2세포적조망.결과 성공구건료survivin siRNA표체재체,병차si-survivin대survivin유명현억제효응,가현저억제HepG2세포적발생조망.전염Survivin-siRNA 세포활성수도현저억제(P<0.05),광경하출현명현적조망형태,DNA전영출현전형적조망"제상"대.RT-PCR 결과현시세포전염24 h、48 h화72 h 후HepG2 Survivin mRNA 분별감소료56%、78%화50%,이siRNA 음성대조여미전염세포상비차이불현저.결론 전염적Survivin-siRNA 가특이성억제간암세포주HepG2조망억제기인적표체,종이위종류적기인치료제공신적실험기출.
