中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2002年
1期
38-41
,共4页
钟敏%温博海%陈荣%王安容%蹇锐%王易伟
鐘敏%溫博海%陳榮%王安容%蹇銳%王易偉
종민%온박해%진영%왕안용%건예%왕역위
分枝杆菌,结核%利福平%基因型%聚合酶链反应%多态现象,单链构象
分枝桿菌,結覈%利福平%基因型%聚閤酶鏈反應%多態現象,單鏈構象
분지간균,결핵%리복평%기인형%취합매련반응%다태현상,단련구상
目的建立聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法,并评价其临床应用的价值.方法依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物,用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段;对扩得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析,并随机测定rpoB片段的序列.结果 PCR从所有212株结核分枝杆菌中均扩得230 bp片段,135份抗酸染色阳性的痰标本中,有113份扩得阳性片段(83.7%).在SSCP分析中,140份经L-J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌,有130份有rpoB基因突变(符合率为92.9%),72份经L-J药敏试验检测为利福平敏感的菌,有67份的rpoB基因无突变(符合率为93.1%).测序分析发现57份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变,10份经SSCP分析为无突变的有8份无序列改变,SSCP与测序结果的符合率为94.0%.在本研究的菌株中,耐多药结核病(MDR-TB)占76.4%(107/140),有92.5%(99/107)耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变.结论建立的PCR-SSCP分析方法,是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法,可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性,并可作为MDR-TB判断的一个重要指标.
目的建立聚閤酶鏈反應-單鏈構象多態性(PCR-SSCP)檢測結覈分枝桿菌rpoB基因突變的方法,併評價其臨床應用的價值.方法依據結覈分枝桿菌rpoB基因的耐利福平決定區設計引物,用PCR從臨床分離株和直接從痰標本中擴增rpoB基因片段;對擴得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析,併隨機測定rpoB片段的序列.結果 PCR從所有212株結覈分枝桿菌中均擴得230 bp片段,135份抗痠染色暘性的痰標本中,有113份擴得暘性片段(83.7%).在SSCP分析中,140份經L-J藥敏試驗檢測為利福平耐受的結覈分枝桿菌,有130份有rpoB基因突變(符閤率為92.9%),72份經L-J藥敏試驗檢測為利福平敏感的菌,有67份的rpoB基因無突變(符閤率為93.1%).測序分析髮現57份經SSCP檢測為突變的rpoB片段均有序列改變,10份經SSCP分析為無突變的有8份無序列改變,SSCP與測序結果的符閤率為94.0%.在本研究的菌株中,耐多藥結覈病(MDR-TB)佔76.4%(107/140),有92.5%(99/107)耐多藥菌株經SSCP檢測有rpoB突變.結論建立的PCR-SSCP分析方法,是一種較準確和穩定的檢測結覈分枝桿菌rpoB基因突變的方法,可用于臨床快速分析患者結覈分枝桿菌對利福平的耐藥性,併可作為MDR-TB判斷的一箇重要指標.
목적건립취합매련반응-단련구상다태성(PCR-SSCP)검측결핵분지간균rpoB기인돌변적방법,병평개기림상응용적개치.방법의거결핵분지간균rpoB기인적내리복평결정구설계인물,용PCR종림상분리주화직접종담표본중확증rpoB기인편단;대확득적rpoB기인편단주DNA SSCP분석,병수궤측정rpoB편단적서렬.결과 PCR종소유212주결핵분지간균중균확득230 bp편단,135빈항산염색양성적담표본중,유113빈확득양성편단(83.7%).재SSCP분석중,140빈경L-J약민시험검측위리복평내수적결핵분지간균,유130빈유rpoB기인돌변(부합솔위92.9%),72빈경L-J약민시험검측위리복평민감적균,유67빈적rpoB기인무돌변(부합솔위93.1%).측서분석발현57빈경SSCP검측위돌변적rpoB편단균유서렬개변,10빈경SSCP분석위무돌변적유8빈무서렬개변,SSCP여측서결과적부합솔위94.0%.재본연구적균주중,내다약결핵병(MDR-TB)점76.4%(107/140),유92.5%(99/107)내다약균주경SSCP검측유rpoB돌변.결론건립적PCR-SSCP분석방법,시일충교준학화은정적검측결핵분지간균rpoB기인돌변적방법,가용우림상쾌속분석환자결핵분지간균대리복평적내약성,병가작위MDR-TB판단적일개중요지표.
