临床检验杂志
臨床檢驗雜誌
림상검험잡지
2003年
6期
330-332
,共3页
郭晏海%吕贯庭%赵锦荣%张菊%白玉洁%闫小君
郭晏海%呂貫庭%趙錦榮%張菊%白玉潔%閆小君
곽안해%려관정%조금영%장국%백옥길%염소군
荧光偏振%突变%HBV DNA
熒光偏振%突變%HBV DNA
형광편진%돌변%HBV DNA
目的建立简便、多重HBV 多聚酶基因序列中拉米呋啶耐药性相关的基因突变的检测方法.方法采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测.对HBV多聚酶基因进行PCR扩增,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交,使探针的3′可以在DNA聚合酶的作用下,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP,然后检测该3′端带有荧光素的探针,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度判定待测点是何种核苷酸.结果该方法可以检测出HBV 多聚酶基因序列中特定位置的核苷酸类型,能检测1×101个拷贝的模板量.对30例经过6个月以上拉米呋啶治疗的患者血清进行检测,检测出其中有3例是甲硫氨酸(M)密码子ATG中的A→G变异;2例是ATG中的G→C变异;1例是ATG中的G→T.结论该技术可以对血清中HBV 多聚酶基因序列中点突变以及其他基因突变进行检测.
目的建立簡便、多重HBV 多聚酶基因序列中拉米呋啶耐藥性相關的基因突變的檢測方法.方法採用終點終止法和偏振光檢測技術進行點突變的檢測.對HBV多聚酶基因進行PCR擴增,然後用特異探針與擴增產物中待測覈苷痠的下遊序列雜交,使探針的3′可以在DNA聚閤酶的作用下,依據其互補鏈上的待測覈苷痠連接上一箇標有特定熒光素的ddNTP,然後檢測該3′耑帶有熒光素的探針,根據檢測到的熒光素種類和偏振光的彊度判定待測點是何種覈苷痠.結果該方法可以檢測齣HBV 多聚酶基因序列中特定位置的覈苷痠類型,能檢測1×101箇拷貝的模闆量.對30例經過6箇月以上拉米呋啶治療的患者血清進行檢測,檢測齣其中有3例是甲硫氨痠(M)密碼子ATG中的A→G變異;2例是ATG中的G→C變異;1例是ATG中的G→T.結論該技術可以對血清中HBV 多聚酶基因序列中點突變以及其他基因突變進行檢測.
목적건립간편、다중HBV 다취매기인서렬중랍미부정내약성상관적기인돌변적검측방법.방법채용종점종지법화편진광검측기술진행점돌변적검측.대HBV다취매기인진행PCR확증,연후용특이탐침여확증산물중대측핵감산적하유서렬잡교,사탐침적3′가이재DNA취합매적작용하,의거기호보련상적대측핵감산련접상일개표유특정형광소적ddNTP,연후검측해3′단대유형광소적탐침,근거검측도적형광소충류화편진광적강도판정대측점시하충핵감산.결과해방법가이검측출HBV 다취매기인서렬중특정위치적핵감산류형,능검측1×101개고패적모판량.대30례경과6개월이상랍미부정치료적환자혈청진행검측,검측출기중유3례시갑류안산(M)밀마자ATG중적A→G변이;2례시ATG중적G→C변이;1례시ATG중적G→T.결론해기술가이대혈청중HBV 다취매기인서렬중점돌변이급기타기인돌변진행검측.
