CAJ | 학술논문

目的:研究表明,体内一定浓度的生长因子是保证眼球正常发育的必要条件,过少或过量都会引起巩膜的异常改变.实验拟进一步验证胰岛素样生长因子Ⅰ对体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞生长的影响.方法:实验于2006-0912007-03在郑州大学基础医学院省肿瘤病理学重点实验室完成.①实验材料:出生3 d内3色豚鼠后部巩膜组织由郑州大学基础医学院动物实验中心提供;实验用胰岛素样生长因子Ⅰ为Sigma公司产品.②实验过程及评估:采用器官组织块培养法获取原代巩膜成纤维细胞,选取传3,4代的豚鼠巩膜成纤维细胞用于实验;采用倒置相差显微镜下观察细胞形态并采用免疫化学染色法进行细胞鉴定:应用四甲基偶氮唑盐比色法和流式细胞仪分析技术,观察不同质量浓度胰岛素样生长因子Ⅰ(0.1,0.5,5,10,50 μg/L)对体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞生长周期的影响.结果:①巩膜成纤维细胞鉴定:倒置相差显微镜下观察,细胞透亮呈梭形,在细胞密度较低时细胞排列成网状,密度较高时呈束状:波形蛋白染色阳性.胞浆内可见棕黄色阳性反应产物,证实所培养的细胞为巩膜成纤维细胞.②体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞生长周期:0.5,5,10μg/L的胰岛素样生长因子Ⅰ能促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(F=84,510,P=0.000＜0.05),最佳质量浓度为10 μg/L.流式细胞仪结果显示,胰岛素样生长因子Ⅰ处理48 h后,与对照组比较,巩膜成纤维细胞G0-G31期百分比降低(78.2%下到64.5%,P＜0.05),而s期百分比显著升高(10.4%上升到16.4%,P＜0.05),增殖指数百分比增高(27.8%增高到56.5%,P＜0.05).结论: 在一定浓度范围内外源性胰岛素样生长因子Ⅰ可以促进体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞增殖.
목적:연구표명,체내일정농도적생장인자시보증안구정상발육적필요조건,과소혹과량도회인기공막적이상개변.실험의진일보험증이도소양생장인자Ⅰ대체외배양적돈서공막성섬유세포생장적영향.방법:실험우2006-0912007-03재정주대학기출의학원성종류병이학중점실험실완성.①실험재료:출생3 d내3색돈서후부공막조직유정주대학기출의학원동물실험중심제공;실험용이도소양생장인자Ⅰ위Sigma공사산품.②실험과정급평고:채용기관조직괴배양법획취원대공막성섬유세포,선취전3,4대적돈서공막성섬유세포용우실험;채용도치상차현미경하관찰세포형태병채용면역화학염색법진행세포감정:응용사갑기우담서염비색법화류식세포의분석기술,관찰불동질량농도이도소양생장인자Ⅰ(0.1,0.5,5,10,50 μg/L)대체외배양적돈서공막성섬유세포증식화세포생장주기적영향.결과:①공막성섬유세포감정:도치상차현미경하관찰,세포투량정사형,재세포밀도교저시세포배렬성망상,밀도교고시정속상:파형단백염색양성.포장내가견종황색양성반응산물,증실소배양적세포위공막성섬유세포.②체외배양적돈서공막성섬유세포증식화세포생장주기:0.5,5,10μg/L적이도소양생장인자Ⅰ능촉진돈서공막성섬유세포증식,정제량의뢰성(F=84,510,P=0.000＜0.05),최가질량농도위10 μg/L.류식세포의결과현시,이도소양생장인자Ⅰ처리48 h후,여대조조비교,공막성섬유세포G0-G31기백분비강저(78.2%하도64.5%,P＜0.05),이s기백분비현저승고(10.4%상승도16.4%,P＜0.05),증식지수백분비증고(27.8%증고도56.5%,P＜0.05).결론: 재일정농도범위내외원성이도소양생장인자Ⅰ가이촉진체외배양적돈서공막성섬유세포증식.