中国中西医结合肾病杂志
中國中西醫結閤腎病雜誌
중국중서의결합신병잡지
CHINESE JOURNAL OF INTEGRATED TRADITIONAL AND WESTERN NEPHROLOGY
2009年
5期
404-408,插页3
,共6页
曹建南%郭汉城%丘昭文%修亦斌%关天俊
曹建南%郭漢城%丘昭文%脩亦斌%關天俊
조건남%곽한성%구소문%수역빈%관천준
泛素-蛋白酶体途径%人肾小管上皮细胞%转分化%细胞凋亡
汎素-蛋白酶體途徑%人腎小管上皮細胞%轉分化%細胞凋亡
범소-단백매체도경%인신소관상피세포%전분화%세포조망
目的:探讨蛋白酶体抑制刺MG-132对体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化和凋亡的影响及其机制.方法:体外培养HK-2细胞,随机分组:对照组,TGF-β1刺激组(5μg/L),MG-132组(2.5μmol/L),MG-132+TGF-β1组(MG-132 2.5 μmol/L孵育30 min后再加TGF-β15 μg/L).培养24 h后收集细胞,RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达;Western免疫印迹检测Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IkB-α和IkB-α蛋白表达;免疫组织化学检测胞浆中Fn和α-SMA的表达;Hoecht 33258染色免疫荧光检测细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:TGF-β1刺激组HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白表达水平较对照组高(P＜0.05),但Smad7 mRNA及蛋白表达水平较对照组低(P＜0.05),且胞浆中FN和α-SMA水平较对照组高(P＜0.05).MG-132+TGF-β1组与TGF-β1刺激组比较,Smurf1、Smurf2 mRNA表达降低(P＜0.05),Smad7 mRNA略升高(P＞0.05),而Smad7蛋白明显升高(P＜0.05),胞浆中Fn和α-SMA表达减少.MG-132组、MG-132+TGF-β1组分别与对照组及TGF-β1组比较,P-IkB-α和IkB-α蛋白浓度升高,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MG-132可抑制TGF-β1诱导的HK-2Smurf1、Smuif2的表达,促进Smad7表达,抑制其降解,减轻FN和α-SMA的表达,从而抑制HK-2转分化;另一方面,MG132可能通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞NF-kB活化促进HK-2细胞凋亡.
目的:探討蛋白酶體抑製刺MG-132對體外培養的人近耑腎小管上皮細胞(HK-2)轉分化和凋亡的影響及其機製.方法:體外培養HK-2細胞,隨機分組:對照組,TGF-β1刺激組(5μg/L),MG-132組(2.5μmol/L),MG-132+TGF-β1組(MG-132 2.5 μmol/L孵育30 min後再加TGF-β15 μg/L).培養24 h後收集細胞,RT-PCR法檢測Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的錶達;Western免疫印跡檢測Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IkB-α和IkB-α蛋白錶達;免疫組織化學檢測胞漿中Fn和α-SMA的錶達;Hoecht 33258染色免疫熒光檢測細胞凋亡形態變化,流式細胞術檢測細胞凋亡率.結果:TGF-β1刺激組HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白錶達水平較對照組高(P＜0.05),但Smad7 mRNA及蛋白錶達水平較對照組低(P＜0.05),且胞漿中FN和α-SMA水平較對照組高(P＜0.05).MG-132+TGF-β1組與TGF-β1刺激組比較,Smurf1、Smurf2 mRNA錶達降低(P＜0.05),Smad7 mRNA略升高(P＞0.05),而Smad7蛋白明顯升高(P＜0.05),胞漿中Fn和α-SMA錶達減少.MG-132組、MG-132+TGF-β1組分彆與對照組及TGF-β1組比較,P-IkB-α和IkB-α蛋白濃度升高,細胞凋亡率增加,差異有統計學意義(P＜0.05).結論:MG-132可抑製TGF-β1誘導的HK-2Smurf1、Smuif2的錶達,促進Smad7錶達,抑製其降解,減輕FN和α-SMA的錶達,從而抑製HK-2轉分化;另一方麵,MG132可能通過抑製TGF-β1誘導的HK-2細胞NF-kB活化促進HK-2細胞凋亡.
목적:탐토단백매체억제자MG-132대체외배양적인근단신소관상피세포(HK-2)전분화화조망적영향급기궤제.방법:체외배양HK-2세포,수궤분조:대조조,TGF-β1자격조(5μg/L),MG-132조(2.5μmol/L),MG-132+TGF-β1조(MG-132 2.5 μmol/L부육30 min후재가TGF-β15 μg/L).배양24 h후수집세포,RT-PCR법검측Smurf1、Smurf2화Smad7 mRNA적표체;Western면역인적검측Smurf1、Smurf2、Smad7화P-IkB-α화IkB-α단백표체;면역조직화학검측포장중Fn화α-SMA적표체;Hoecht 33258염색면역형광검측세포조망형태변화,류식세포술검측세포조망솔.결과:TGF-β1자격조HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA급단백표체수평교대조조고(P＜0.05),단Smad7 mRNA급단백표체수평교대조조저(P＜0.05),차포장중FN화α-SMA수평교대조조고(P＜0.05).MG-132+TGF-β1조여TGF-β1자격조비교,Smurf1、Smurf2 mRNA표체강저(P＜0.05),Smad7 mRNA략승고(P＞0.05),이Smad7단백명현승고(P＜0.05),포장중Fn화α-SMA표체감소.MG-132조、MG-132+TGF-β1조분별여대조조급TGF-β1조비교,P-IkB-α화IkB-α단백농도승고,세포조망솔증가,차이유통계학의의(P＜0.05).결론:MG-132가억제TGF-β1유도적HK-2Smurf1、Smuif2적표체,촉진Smad7표체,억제기강해,감경FN화α-SMA적표체,종이억제HK-2전분화;령일방면,MG132가능통과억제TGF-β1유도적HK-2세포NF-kB활화촉진HK-2세포조망.
