现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2011年
6期
1058-1063
,共6页
Canstatin基因%慢病毒%凋亡%基因治疗
Canstatin基因%慢病毒%凋亡%基因治療
Canstatin기인%만병독%조망%기인치료
目的:构建携带Canstatin基因的慢病毒载体,体外转染脐静脉血管内皮细胞ECV304,观察其体外培养的脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响.方法:应用基因重组技术构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Canstatin,通过酶切、测序验证Canstatin基因后,将pGC-FU-Canstatin质粒和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Canstatin基因重组慢病毒GC-FU-Canstatin,并测定病毒滴度.将重组慢病毒转染靶细胞人脐静脉血管内皮细胞ECV304,通过Western blotting检测靶细胞中Canstatin的表达.采用 MTT法观察 Canstatin基因对人脐静脉血管内皮细胞 ECV304的体外细胞增殖的影响.TUNEL染色、流式细胞仪 AnnexinV /碘化丙啶双染法,检测慢病毒介导的 Canstatin基因诱导脐静脉血管内皮细胞的凋亡.结果:pGC-FU-Canstatin中携有正确的Canstatin基因序列; pGC-FU-Canstatin和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染包装细胞293T产生重组病毒GC-FU-Canstatin;检测病毒滴度为1×109TU/ml;Western blotting检测到Canstatin蛋白在靶细胞中持续表达.Canstatin(感染复数分别为25和50)作用72h后,ECV304细胞增殖数目 显著少于PBS组和空载体组(P<0.01);TUNEL染色,以MOI为25的重组慢病毒GC-FU-Canstain作用于人脐静脉血管内皮细胞ECV304细胞72h后,出现典型的凋亡形态学改变.以感染复数为25的GC-FU-Canstatin处理ECV304细胞72h后,细胞凋亡率为(21.63±1.32)%,PBS组为(2.87±0.76)%,空载体组为(2.66±0.69)%,转基因组与空载体组、PBS组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01).结论:慢病毒介导的Canstatin基因可显著抵制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外增殖,同时对人脐静脉血管内皮细胞的凋亡具有促诱导作用.
目的:構建攜帶Canstatin基因的慢病毒載體,體外轉染臍靜脈血管內皮細胞ECV304,觀察其體外培養的臍靜脈血管內皮細胞增殖及凋亡的影響.方法:應用基因重組技術構建慢病毒載體錶達質粒pGC-FU-Canstatin,通過酶切、測序驗證Canstatin基因後,將pGC-FU-Canstatin質粒和包裝質粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共同轉染人胚胎腎上皮細胞繫293T細胞,穫得攜帶Canstatin基因重組慢病毒GC-FU-Canstatin,併測定病毒滴度.將重組慢病毒轉染靶細胞人臍靜脈血管內皮細胞ECV304,通過Western blotting檢測靶細胞中Canstatin的錶達.採用 MTT法觀察 Canstatin基因對人臍靜脈血管內皮細胞 ECV304的體外細胞增殖的影響.TUNEL染色、流式細胞儀 AnnexinV /碘化丙啶雙染法,檢測慢病毒介導的 Canstatin基因誘導臍靜脈血管內皮細胞的凋亡.結果:pGC-FU-Canstatin中攜有正確的Canstatin基因序列; pGC-FU-Canstatin和包裝質粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共轉染包裝細胞293T產生重組病毒GC-FU-Canstatin;檢測病毒滴度為1×109TU/ml;Western blotting檢測到Canstatin蛋白在靶細胞中持續錶達.Canstatin(感染複數分彆為25和50)作用72h後,ECV304細胞增殖數目 顯著少于PBS組和空載體組(P<0.01);TUNEL染色,以MOI為25的重組慢病毒GC-FU-Canstain作用于人臍靜脈血管內皮細胞ECV304細胞72h後,齣現典型的凋亡形態學改變.以感染複數為25的GC-FU-Canstatin處理ECV304細胞72h後,細胞凋亡率為(21.63±1.32)%,PBS組為(2.87±0.76)%,空載體組為(2.66±0.69)%,轉基因組與空載體組、PBS組相比差異均有顯著統計學意義(P<0.01).結論:慢病毒介導的Canstatin基因可顯著牴製人臍靜脈血管內皮細胞ECV304的體外增殖,同時對人臍靜脈血管內皮細胞的凋亡具有促誘導作用.
목적:구건휴대Canstatin기인적만병독재체,체외전염제정맥혈관내피세포ECV304,관찰기체외배양적제정맥혈관내피세포증식급조망적영향.방법:응용기인중조기술구건만병독재체표체질립pGC-FU-Canstatin,통과매절、측서험증Canstatin기인후,장pGC-FU-Canstatin질립화포장질립pHelper 1.0,pHelper 2.0공동전염인배태신상피세포계293T세포,획득휴대Canstatin기인중조만병독GC-FU-Canstatin,병측정병독적도.장중조만병독전염파세포인제정맥혈관내피세포ECV304,통과Western blotting검측파세포중Canstatin적표체.채용 MTT법관찰 Canstatin기인대인제정맥혈관내피세포 ECV304적체외세포증식적영향.TUNEL염색、류식세포의 AnnexinV /전화병정쌍염법,검측만병독개도적 Canstatin기인유도제정맥혈관내피세포적조망.결과:pGC-FU-Canstatin중휴유정학적Canstatin기인서렬; pGC-FU-Canstatin화포장질립pHelper 1.0,pHelper 2.0공전염포장세포293T산생중조병독GC-FU-Canstatin;검측병독적도위1×109TU/ml;Western blotting검측도Canstatin단백재파세포중지속표체.Canstatin(감염복수분별위25화50)작용72h후,ECV304세포증식수목 현저소우PBS조화공재체조(P<0.01);TUNEL염색,이MOI위25적중조만병독GC-FU-Canstain작용우인제정맥혈관내피세포ECV304세포72h후,출현전형적조망형태학개변.이감염복수위25적GC-FU-Canstatin처리ECV304세포72h후,세포조망솔위(21.63±1.32)%,PBS조위(2.87±0.76)%,공재체조위(2.66±0.69)%,전기인조여공재체조、PBS조상비차이균유현저통계학의의(P<0.01).결론:만병독개도적Canstatin기인가현저저제인제정맥혈관내피세포ECV304적체외증식,동시대인제정맥혈관내피세포적조망구유촉유도작용.
