基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2011年
6期
609-614
,共6页
蒋崇亮%汪晓艳%龚佳男%王芳%余佳%冯涛
蔣崇亮%汪曉豔%龔佳男%王芳%餘佳%馮濤
장숭량%왕효염%공가남%왕방%여가%풍도
miR-29b%胃癌细胞%慢病毒%细胞迁移%细胞增殖
miR-29b%胃癌細胞%慢病毒%細胞遷移%細胞增殖
miR-29b%위암세포%만병독%세포천이%세포증식
目的 构建has-miR-29b重组慢病毒的表达载体,并观察其对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响.方法 将PCR扩增的miR-29b前体序列和pMIR载体经双酶切后连接产生pMIR-miR-29b慢病毒表达载体.pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G质粒共转染包装细胞系293TN,包装产生慢病毒.使用收获的慢病毒颗粒感染胃癌细胞系HGC-27,72 h后利用real-time PCR检测miR-29b在HGC-27内的表达水平,Western blot检测其靶基因MCL-1的表达.划痕实验和细胞增殖实验分别观察在HGC-27细胞中过表达miR-29b后细胞迁移能力及增殖能力的变化.结果 成功构建了miR-29b重组慢病毒的表达载体,感染胃癌细胞HGC-27后,能够成功过表达miR-29b.在HGC-27细胞中过表达miR-29b,其靶基因MCL-1的表达明显被抑制,并且Lenti-29b组与对照组Untreat组和Lenti-vector组相比,Lenti-29b组的迁移能力显著降低(P<0.01);Lenti-29b组与Lenti-vector组相比,Lenti-29b组在48、72及96 h 3个时间点的增殖能力均显著下降(P<0.01).结论 成功获得过表达miR-29b的重组慢病毒颗粒,miR-29b能够抑制其靶基因MCL-1的表达,并对HGC-27细胞的迁移和增殖有明显的抑制作用.
目的 構建has-miR-29b重組慢病毒的錶達載體,併觀察其對胃癌細胞繫遷移和增殖能力的影響.方法 將PCR擴增的miR-29b前體序列和pMIR載體經雙酶切後連接產生pMIR-miR-29b慢病毒錶達載體.pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G質粒共轉染包裝細胞繫293TN,包裝產生慢病毒.使用收穫的慢病毒顆粒感染胃癌細胞繫HGC-27,72 h後利用real-time PCR檢測miR-29b在HGC-27內的錶達水平,Western blot檢測其靶基因MCL-1的錶達.劃痕實驗和細胞增殖實驗分彆觀察在HGC-27細胞中過錶達miR-29b後細胞遷移能力及增殖能力的變化.結果 成功構建瞭miR-29b重組慢病毒的錶達載體,感染胃癌細胞HGC-27後,能夠成功過錶達miR-29b.在HGC-27細胞中過錶達miR-29b,其靶基因MCL-1的錶達明顯被抑製,併且Lenti-29b組與對照組Untreat組和Lenti-vector組相比,Lenti-29b組的遷移能力顯著降低(P<0.01);Lenti-29b組與Lenti-vector組相比,Lenti-29b組在48、72及96 h 3箇時間點的增殖能力均顯著下降(P<0.01).結論 成功穫得過錶達miR-29b的重組慢病毒顆粒,miR-29b能夠抑製其靶基因MCL-1的錶達,併對HGC-27細胞的遷移和增殖有明顯的抑製作用.
목적 구건has-miR-29b중조만병독적표체재체,병관찰기대위암세포계천이화증식능력적영향.방법 장PCR확증적miR-29b전체서렬화pMIR재체경쌍매절후련접산생pMIR-miR-29b만병독표체재체.pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)화pVSV-G질립공전염포장세포계293TN,포장산생만병독.사용수획적만병독과립감염위암세포계HGC-27,72 h후이용real-time PCR검측miR-29b재HGC-27내적표체수평,Western blot검측기파기인MCL-1적표체.화흔실험화세포증식실험분별관찰재HGC-27세포중과표체miR-29b후세포천이능력급증식능력적변화.결과 성공구건료miR-29b중조만병독적표체재체,감염위암세포HGC-27후,능구성공과표체miR-29b.재HGC-27세포중과표체miR-29b,기파기인MCL-1적표체명현피억제,병차Lenti-29b조여대조조Untreat조화Lenti-vector조상비,Lenti-29b조적천이능력현저강저(P<0.01);Lenti-29b조여Lenti-vector조상비,Lenti-29b조재48、72급96 h 3개시간점적증식능력균현저하강(P<0.01).결론 성공획득과표체miR-29b적중조만병독과립,miR-29b능구억제기파기인MCL-1적표체,병대HGC-27세포적천이화증식유명현적억제작용.
