CAJ | 학술논문

目的构建pGEX-6P-1-SjHSP40(SjHSP40)融合表达载体并在大肠埃希菌(Escherich coli)内进行原核表达及重组蛋白纯化,以探讨SjHSP40对巨噬细胞活化的影响.方法以PCR方法扩增SjHSP40基因片段,将其克隆人原核表达质粒pGEX-6P-1,经测序验证后转化入E.coli BL21 (DE3)中.重组蛋白经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后以Glutathione-Sepharose 4B亲和柱进行纯化.所得产物GST-SjHSP40进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot鉴定.将此融合蛋白负载巨噬细胞48 h后,用流式细胞术检测巨噬细胞表面分子.结果测序结果表明,本研究成功构建了pGEX-6P-1-SjHSP40原核表达载体,经IPTG诱导表达出融合蛋白.Western blot显示该融合蛋白能被抗GST抗体特异性识别.与GST等对照组相比,此融合蛋白负载的巨噬细胞表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86)及MHCⅡ分子表达显著上调.结论 SjHSP40可显著上调巨噬细胞表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86)及MHCⅡ分子的表达,提示其可在一定程度上使巨噬细胞活化.
목적 구건pGEX-6P-1-SjHSP40(SjHSP40)융합표체재체병재대장애희균(Escherich coli)내진행원핵표체급중조단백순화,이탐토SjHSP40대거서세포활화적영향.방법 이PCR방법확증SjHSP40기인편단,장기극륭인원핵표체질립pGEX-6P-1,경측서험증후전화입E.coli BL21 (DE3)중.중조단백경이병기류대반유당감(IPTG)유도표체후이Glutathione-Sepharose 4B친화주진행순화.소득산물GST-SjHSP40진행십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、Western blot감정.장차융합단백부재거서세포48 h후,용류식세포술검측거서세포표면분자.결과 측서결과표명,본연구성공구건료pGEX-6P-1-SjHSP40원핵표체재체,경IPTG유도표체출융합단백.Western blot현시해융합단백능피항GST항체특이성식별.여GST등대조조상비,차융합단백부재적거서세포표면공자격분자(CD40、CD80、CD86)급MHCⅡ분자표체현저상조.결론 SjHSP40가현저상조거서세포표면공자격분자(CD40、CD80、CD86)급MHCⅡ분자적표체,제시기가재일정정도상사거서세포활화.