吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2006年
5期
750-754,封2
,共6页
曲福军%戚良晨%侯宜%侯立中
麯福軍%慼良晨%侯宜%侯立中
곡복군%척량신%후의%후립중
骨形态发生蛋白质类%软骨细胞%遗传载体
骨形態髮生蛋白質類%軟骨細胞%遺傳載體
골형태발생단백질류%연골세포%유전재체
目的:克隆骨形态发生蛋白BMP7基因并检测其在体外培养的兔关节软骨细胞中的表达.方法:从体外培养的幼兔膝关节软骨细胞中提取总RNA按GenBank BMP7基因序列化学合成2条引物,采用RT-PCR方法得到BMP7基因;将BMP7基因片段插入到真核表达载体pcDNA 3.1中,构建pcDNA3.1-BMP7真核表达载体质粒;利用双酶切、PCR及核苷酸序列分析鉴定BMP7目的基因;将重组pcDNA3.1-BMP7真核表达载体质粒转染家兔关节软骨细胞,分别采用原位杂交、PCR、Western blotting法测定BMP-7表达.结果:克隆得到的BMP7基因核苷酸序列长约1 300 bp,构建的重组pcDNA 3.1-BMP7真核表达载体质粒目的基因BMP-7序列与GenBank报道的BMP-7基因(No.BC008584)一致,转染了BMP7基因的体外培养的成年家兔膝关节软骨细胞表达了BMP7蛋白.结论:成功构建表达BMP7蛋白的转基因关节软骨细胞,其可用于细胞移植治疗或作为种子细胞构建组织工程软骨修复关节软骨缺损.
目的:剋隆骨形態髮生蛋白BMP7基因併檢測其在體外培養的兔關節軟骨細胞中的錶達.方法:從體外培養的幼兔膝關節軟骨細胞中提取總RNA按GenBank BMP7基因序列化學閤成2條引物,採用RT-PCR方法得到BMP7基因;將BMP7基因片段插入到真覈錶達載體pcDNA 3.1中,構建pcDNA3.1-BMP7真覈錶達載體質粒;利用雙酶切、PCR及覈苷痠序列分析鑒定BMP7目的基因;將重組pcDNA3.1-BMP7真覈錶達載體質粒轉染傢兔關節軟骨細胞,分彆採用原位雜交、PCR、Western blotting法測定BMP-7錶達.結果:剋隆得到的BMP7基因覈苷痠序列長約1 300 bp,構建的重組pcDNA 3.1-BMP7真覈錶達載體質粒目的基因BMP-7序列與GenBank報道的BMP-7基因(No.BC008584)一緻,轉染瞭BMP7基因的體外培養的成年傢兔膝關節軟骨細胞錶達瞭BMP7蛋白.結論:成功構建錶達BMP7蛋白的轉基因關節軟骨細胞,其可用于細胞移植治療或作為種子細胞構建組織工程軟骨脩複關節軟骨缺損.
목적:극륭골형태발생단백BMP7기인병검측기재체외배양적토관절연골세포중적표체.방법:종체외배양적유토슬관절연골세포중제취총RNA안GenBank BMP7기인서렬화학합성2조인물,채용RT-PCR방법득도BMP7기인;장BMP7기인편단삽입도진핵표체재체pcDNA 3.1중,구건pcDNA3.1-BMP7진핵표체재체질립;이용쌍매절、PCR급핵감산서렬분석감정BMP7목적기인;장중조pcDNA3.1-BMP7진핵표체재체질립전염가토관절연골세포,분별채용원위잡교、PCR、Western blotting법측정BMP-7표체.결과:극륭득도적BMP7기인핵감산서렬장약1 300 bp,구건적중조pcDNA 3.1-BMP7진핵표체재체질립목적기인BMP-7서렬여GenBank보도적BMP-7기인(No.BC008584)일치,전염료BMP7기인적체외배양적성년가토슬관절연골세포표체료BMP7단백.결론:성공구건표체BMP7단백적전기인관절연골세포,기가용우세포이식치료혹작위충자세포구건조직공정연골수복관절연골결손.
