CAJ | 학술논문

目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据.方法:通过PCR 技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23 基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23.将该载体导入AmphoPackTM-293 细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418 抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系.采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位.结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白.共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23 定位于细胞质,处于细胞核周边.结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系.该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程.
목적:건립은정표체인거세포병독UL23기인적HELF세포계,연구병독단백재숙주세포내행위,위진일보연구인거세포병독단백pUL23적공능제공의거.방법:통과PCR 기술종인거세포병독기인조중확증출UL23 기인,통과분자극륭기술구건중조역전록병독표체재체pLEGFP-N1-FLAG-UL23.장해재체도입AmphoPackTM-293 세포,수획중조역전록병독,연후감염HELF세포,HELF경지속G418 항성사선후획득은정표체UL23기인적세포계.채용격광공취초현미경관찰병독단백재세포내적정위.결과:RT-PCR、Western blotting결과증실병독기인UL23능구정합도숙주세포기인조중,병능재숙주세포중은정표체병독단백.공취초현미경관찰도병독단백pUL23 정위우세포질,처우세포핵주변.결론:이용역전록병독재체개도적기인전이기술,성공구건료은정표체UL23기인적전기인세포계.해병독단백재숙주세포질중적정위,제시병독단백발휘공능적공간위우세포핵주변,유리지추진료인거세포병독단백pUL23공능연구적진정.