畜牧与饲料科学
畜牧與飼料科學
축목여사료과학
ANIMAL HUSBANDRY AND FEED SCIENCE
2010年
3期
3-6
,共4页
屠利民%彭开松%涂健%王强%王莹莹%祁克宗
屠利民%彭開鬆%塗健%王彊%王瑩瑩%祁剋宗
도이민%팽개송%도건%왕강%왕형형%기극종
gal-2%毕赤酵母细胞%Mut表型%蛋白表达%安徽三黄鸡
gal-2%畢赤酵母細胞%Mut錶型%蛋白錶達%安徽三黃鷄
gal-2%필적효모세포%Mut표형%단백표체%안휘삼황계
目的:构建安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)基因的真核表达栽体,表达gal-2蛋白.方法:提取鸡肺组织中总RNA,应用RT-PCR技术获得鸡β-防御素2(gal-2)全长eDNA基因片段,经PCR获得gal-2的成熟肽基因片段,并将其克隆入真核表达载体pPIC3.5K中,构建重组表达质粒pPIC3.5K-gal-2;经测序鉴定正确后,电转化巴斯德毕赤酵母菌GS115.经甲醇诱导表达gal-2蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析.结果:通过电转化方法成功将经酶切线性化的重组表达质粒整合入宿主菌基因组中,并在甲醇诱导的条件下成功表达出了目的蛋白.结论:成功构建了重组真核表达质粒pPIC3.5K-gal-2;并借助巴斯德毕赤酵母细胞表达出了gal-2的蛋白,其分子量大约为4.1 kDa.该研究为下一步应用基因工程和蛋白质工程技术进行gal-2蛋白的规模化生产奠定了基础.
目的:構建安徽三黃鷄β-防禦素2(gal-2)基因的真覈錶達栽體,錶達gal-2蛋白.方法:提取鷄肺組織中總RNA,應用RT-PCR技術穫得鷄β-防禦素2(gal-2)全長eDNA基因片段,經PCR穫得gal-2的成熟肽基因片段,併將其剋隆入真覈錶達載體pPIC3.5K中,構建重組錶達質粒pPIC3.5K-gal-2;經測序鑒定正確後,電轉化巴斯德畢赤酵母菌GS115.經甲醇誘導錶達gal-2蛋白,對錶達產物進行SDS-PAGE電泳分析.結果:通過電轉化方法成功將經酶切線性化的重組錶達質粒整閤入宿主菌基因組中,併在甲醇誘導的條件下成功錶達齣瞭目的蛋白.結論:成功構建瞭重組真覈錶達質粒pPIC3.5K-gal-2;併藉助巴斯德畢赤酵母細胞錶達齣瞭gal-2的蛋白,其分子量大約為4.1 kDa.該研究為下一步應用基因工程和蛋白質工程技術進行gal-2蛋白的規模化生產奠定瞭基礎.
목적:구건안휘삼황계β-방어소2(gal-2)기인적진핵표체재체,표체gal-2단백.방법:제취계폐조직중총RNA,응용RT-PCR기술획득계β-방어소2(gal-2)전장eDNA기인편단,경PCR획득gal-2적성숙태기인편단,병장기극륭입진핵표체재체pPIC3.5K중,구건중조표체질립pPIC3.5K-gal-2;경측서감정정학후,전전화파사덕필적효모균GS115.경갑순유도표체gal-2단백,대표체산물진행SDS-PAGE전영분석.결과:통과전전화방법성공장경매절선성화적중조표체질립정합입숙주균기인조중,병재갑순유도적조건하성공표체출료목적단백.결론:성공구건료중조진핵표체질립pPIC3.5K-gal-2;병차조파사덕필적효모세포표체출료gal-2적단백,기분자량대약위4.1 kDa.해연구위하일보응용기인공정화단백질공정기술진행gal-2단백적규모화생산전정료기출.
