生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
8期
187-191
,共5页
毕赤酵母%代谢调控%基因敲除%转录因子%Mxr1p%南极假丝酵母%脂肪酶B
畢赤酵母%代謝調控%基因敲除%轉錄因子%Mxr1p%南極假絲酵母%脂肪酶B
필적효모%대사조공%기인고제%전록인자%Mxr1p%남겁가사효모%지방매B
为了研究毕赤酵母中转录因子Mxrlp在毕赤酵母代谢调控中所起的作用,构建一株以南极假丝酵母脂肪酶B基因(CALB)作为报告基因,MXR1基因完全缺失的毕赤酵母基因工程菌株.将重组质粒pPIC9K-CALB转化毕赤酵母GS115,利用三丁酸甘油酯平板筛选得到分泌表达CALB的重组茵GS115/pPIC9K-CALB.通过重叠延伸PCR方法获得一段中间含有博来霉素抗性基因sh ble,两翼大约各有1 200 bp与毕赤酵母MXR1基因上下游同源的基因片段,将此片段用氯化锂法转化毕赤酵母细胞GS1 15/pPIC9 K-CALB后,利用博来霉素抗性及CALB酶活力丧失双重筛选的方法得到一株MXR1基因完全缺失的毕赤酵母基因工程菌株.该菌株在以甲醇为唯一碳源的培养基中不生长,在以乙醇、葡萄糖或者甘油为唯一碳源的培养基中生长缓慢.结果表明转录Mxrlp因子在毕赤酵母中的多条代谢途径中起着关键性的作用,主要涉及甲醇、乙醇、甘油和葡萄糖等代谢途径.
為瞭研究畢赤酵母中轉錄因子Mxrlp在畢赤酵母代謝調控中所起的作用,構建一株以南極假絲酵母脂肪酶B基因(CALB)作為報告基因,MXR1基因完全缺失的畢赤酵母基因工程菌株.將重組質粒pPIC9K-CALB轉化畢赤酵母GS115,利用三丁痠甘油酯平闆篩選得到分泌錶達CALB的重組茵GS115/pPIC9K-CALB.通過重疊延伸PCR方法穫得一段中間含有博來黴素抗性基因sh ble,兩翼大約各有1 200 bp與畢赤酵母MXR1基因上下遊同源的基因片段,將此片段用氯化鋰法轉化畢赤酵母細胞GS1 15/pPIC9 K-CALB後,利用博來黴素抗性及CALB酶活力喪失雙重篩選的方法得到一株MXR1基因完全缺失的畢赤酵母基因工程菌株.該菌株在以甲醇為唯一碳源的培養基中不生長,在以乙醇、葡萄糖或者甘油為唯一碳源的培養基中生長緩慢.結果錶明轉錄Mxrlp因子在畢赤酵母中的多條代謝途徑中起著關鍵性的作用,主要涉及甲醇、乙醇、甘油和葡萄糖等代謝途徑.
위료연구필적효모중전록인자Mxrlp재필적효모대사조공중소기적작용,구건일주이남겁가사효모지방매B기인(CALB)작위보고기인,MXR1기인완전결실적필적효모기인공정균주.장중조질립pPIC9K-CALB전화필적효모GS115,이용삼정산감유지평판사선득도분비표체CALB적중조인GS115/pPIC9K-CALB.통과중첩연신PCR방법획득일단중간함유박래매소항성기인sh ble,량익대약각유1 200 bp여필적효모MXR1기인상하유동원적기인편단,장차편단용록화리법전화필적효모세포GS1 15/pPIC9 K-CALB후,이용박래매소항성급CALB매활력상실쌍중사선적방법득도일주MXR1기인완전결실적필적효모기인공정균주.해균주재이갑순위유일탄원적배양기중불생장,재이을순、포도당혹자감유위유일탄원적배양기중생장완만.결과표명전록Mxrlp인자재필적효모중적다조대사도경중기착관건성적작용,주요섭급갑순、을순、감유화포도당등대사도경.
