中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2012年
4期
478-482
,共5页
刘健%谢军明%嵇晴%张利东%朱四海%李伟彦
劉健%謝軍明%嵇晴%張利東%硃四海%李偉彥
류건%사군명%혜청%장리동%주사해%리위언
环磷腺苷%小胶质细胞%炎症细胞因子%蛋白激酶A%环腺苷酸直接活化的交换蛋白%内毒素
環燐腺苷%小膠質細胞%炎癥細胞因子%蛋白激酶A%環腺苷痠直接活化的交換蛋白%內毒素
배린선감%소효질세포%염증세포인자%단백격매A%배선감산직접활화적교환단백%내독소
目的 观察环磷腺苷下游主要效应分子PKA和Epac 对内毒素刺激的原代培养小胶质细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 24孔板接种原代培养的新生大鼠脑小胶质细胞,按不同药物处理分为6组:组1,先用DMSO及HBSS分别孵育30 min,然后HBSS孵育24h；组2,先用DMSO及HBSS分别孵育30 min；组3,先用DMSO及6-Bnz-cAMP 100nmol分别孵育30 min；组4,先用DMSO及8-pCPT-2′-O-Me-cAMP 50 nmol分别孵育30 min；组5,先用50nmol的H-89及6-Bnz-cAMP 100 nmol分别孵育30 min；组6,先用50 nmol的H-89及8-pCPT-2′-O-Me-cAMP 50 nmol分别孵育30 min,最后组2～组6内毒素0.5 μg孵育24h.内毒素处理后0、3、6、24h后,倒置显微镜下观察细胞形态改变,并计算6h时长短轴比值.24h时收集各组上清液,用ELISA法测定TNF-α、IL-1β及IL-10浓度.结果 内毒素刺激后3h,细胞成双极杆状细胞,6h时最为明显,24h细胞形态又恢复至椭圆或阿米巴样.仅6-Bnz-cAMP能明显抑制6h时细胞形态的改变,预给予H -89,能完全逆转6-Bnz-cAMP对细胞形态学的影响.内毒素刺激24h后,6-Bnz-cAMP能明显减少TNF-α、IL-1β的分泌,促进IL-10的释放,H-89能完全逆转该效应.给予50 nmol的8-pCPT-2′-O-Me-cAMP仅减少TNF-α的分泌,H-89不影响8-pCPT-2′-O-Me-cAMP的作用.结论 较Epac,PKA对内毒素刺激的小胶质细胞释放炎症细胞因子发挥主要的作用.
目的 觀察環燐腺苷下遊主要效應分子PKA和Epac 對內毒素刺激的原代培養小膠質細胞分泌炎癥細胞因子的影響.方法 24孔闆接種原代培養的新生大鼠腦小膠質細胞,按不同藥物處理分為6組:組1,先用DMSO及HBSS分彆孵育30 min,然後HBSS孵育24h；組2,先用DMSO及HBSS分彆孵育30 min；組3,先用DMSO及6-Bnz-cAMP 100nmol分彆孵育30 min；組4,先用DMSO及8-pCPT-2′-O-Me-cAMP 50 nmol分彆孵育30 min；組5,先用50nmol的H-89及6-Bnz-cAMP 100 nmol分彆孵育30 min；組6,先用50 nmol的H-89及8-pCPT-2′-O-Me-cAMP 50 nmol分彆孵育30 min,最後組2～組6內毒素0.5 μg孵育24h.內毒素處理後0、3、6、24h後,倒置顯微鏡下觀察細胞形態改變,併計算6h時長短軸比值.24h時收集各組上清液,用ELISA法測定TNF-α、IL-1β及IL-10濃度.結果 內毒素刺激後3h,細胞成雙極桿狀細胞,6h時最為明顯,24h細胞形態又恢複至橢圓或阿米巴樣.僅6-Bnz-cAMP能明顯抑製6h時細胞形態的改變,預給予H -89,能完全逆轉6-Bnz-cAMP對細胞形態學的影響.內毒素刺激24h後,6-Bnz-cAMP能明顯減少TNF-α、IL-1β的分泌,促進IL-10的釋放,H-89能完全逆轉該效應.給予50 nmol的8-pCPT-2′-O-Me-cAMP僅減少TNF-α的分泌,H-89不影響8-pCPT-2′-O-Me-cAMP的作用.結論 較Epac,PKA對內毒素刺激的小膠質細胞釋放炎癥細胞因子髮揮主要的作用.
목적 관찰배린선감하유주요효응분자PKA화Epac 대내독소자격적원대배양소효질세포분비염증세포인자적영향.방법 24공판접충원대배양적신생대서뇌소효질세포,안불동약물처리분위6조:조1,선용DMSO급HBSS분별부육30 min,연후HBSS부육24h；조2,선용DMSO급HBSS분별부육30 min；조3,선용DMSO급6-Bnz-cAMP 100nmol분별부육30 min；조4,선용DMSO급8-pCPT-2′-O-Me-cAMP 50 nmol분별부육30 min；조5,선용50nmol적H-89급6-Bnz-cAMP 100 nmol분별부육30 min；조6,선용50 nmol적H-89급8-pCPT-2′-O-Me-cAMP 50 nmol분별부육30 min,최후조2～조6내독소0.5 μg부육24h.내독소처리후0、3、6、24h후,도치현미경하관찰세포형태개변,병계산6h시장단축비치.24h시수집각조상청액,용ELISA법측정TNF-α、IL-1β급IL-10농도.결과 내독소자격후3h,세포성쌍겁간상세포,6h시최위명현,24h세포형태우회복지타원혹아미파양.부6-Bnz-cAMP능명현억제6h시세포형태적개변,예급여H -89,능완전역전6-Bnz-cAMP대세포형태학적영향.내독소자격24h후,6-Bnz-cAMP능명현감소TNF-α、IL-1β적분비,촉진IL-10적석방,H-89능완전역전해효응.급여50 nmol적8-pCPT-2′-O-Me-cAMP부감소TNF-α적분비,H-89불영향8-pCPT-2′-O-Me-cAMP적작용.결론 교Epac,PKA대내독소자격적소효질세포석방염증세포인자발휘주요적작용.
