中华结核和呼吸杂志
中華結覈和呼吸雜誌
중화결핵화호흡잡지
Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases
2005年
4期
263-267
,共5页
涂明利%王汉琴%雷怀定%罗国仕%刘先军%刘为舜%熊畅%刘玉全%任思群
塗明利%王漢琴%雷懷定%囉國仕%劉先軍%劉為舜%熊暢%劉玉全%任思群
도명리%왕한금%뢰부정%라국사%류선군%류위순%웅창%류옥전%임사군
血管紧张素Ⅱ%肺动脉平滑肌细胞%增殖%迁移%凋亡
血管緊張素Ⅱ%肺動脈平滑肌細胞%增殖%遷移%凋亡
혈관긴장소Ⅱ%폐동맥평활기세포%증식%천이%조망
目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)迁移、增殖和凋亡的影响.方法构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASMC分为DMEM组、AdCMVLacZ组和AdCMVahAT1组,分别给予不同的干预因素干预PASMC,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化及彩色图像分析法检测AT1R的表达情况,并用改良的迁移小室进行细胞迁移实验.又将培养的PASMC分为DMEM组,AngⅡ组,AdCMVLacZ+AngⅡ组和AdCMVahAT1+AngⅡ组,用流式细胞仪检测各组PASMC的增殖指数和凋亡率,绘制DNA合成直方图.结果转染AdCMVahAT1后48 h的PASMC,AT1R mRNA明显低于对照组[AT1R/β-actin吸光度(A)比值:AdCMVahAT1组为0.48,DMEM组为0.97,AdCMVLacZ组为0.96];AdCMVahAT1组AT1R蛋白表达水平(A值为176.39±21.63)显著低于DMEM组(A值为310.21±29.82)和AdCMVLacZ组(A值为306.45±30.09),差异均有统计学意义(P均＜0.01),转染AdCMVahAT1后24 h的PASMC迁移距离为(40.93±9.69)μm,显著短于DMEM组的(78.23±11.79)μm和AdCMVLacZ组的(77.80±10.66)μm,差异均有统计学意义(P均＜0.01).给予AngⅡ刺激48 h,AngⅡ组PASMC的增殖指数(59.69±3.46)显著高于DMEM组(50.25±1.34,P<0.01),转染AdCMVahAT1后再用AngⅡ刺激48 h的AdCMVahAT1+AngⅡ组PASMC的增殖指数(24.67±3.19)则显著低于3个对照组(P均＜0.01),而AdCMVLacZ+AngⅡ组(59.53±3.26)和AngⅡ组比较差异无统计学意义(P>0.05).此时AdCMVahAT1+AngⅡ组出现凋亡峰,而在其他各组未出现明显凋亡峰,AdCMVahAT1+AngⅡ组凋亡率为(24.70±4.04)%,分别与DMEM组的(2.05±1.71)%、AngⅡ组的(2.19±1.99)%、AdCMVLacZ+AngⅡ组的(2.11±1.85)%比较, P均＜0.01.结论反义AT1R通过抑制AT1R的表达,能抑制AngⅡ介导的PASMC迁移和增殖,并具有促PASMC凋亡的作用.
目的探討腺病毒介導的反義血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)1型受體(AT1R)cDNA轉染對培養的人肺動脈平滑肌細胞(PASMC)遷移、增殖和凋亡的影響.方法構建重組反義人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和錶達β半乳糖苷酶的對照腺病毒載體AdCMVLacZ,將培養的PASMC分為DMEM組、AdCMVLacZ組和AdCMVahAT1組,分彆給予不同的榦預因素榦預PASMC,用半定量逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和免疫組化及綵色圖像分析法檢測AT1R的錶達情況,併用改良的遷移小室進行細胞遷移實驗.又將培養的PASMC分為DMEM組,AngⅡ組,AdCMVLacZ+AngⅡ組和AdCMVahAT1+AngⅡ組,用流式細胞儀檢測各組PASMC的增殖指數和凋亡率,繪製DNA閤成直方圖.結果轉染AdCMVahAT1後48 h的PASMC,AT1R mRNA明顯低于對照組[AT1R/β-actin吸光度(A)比值:AdCMVahAT1組為0.48,DMEM組為0.97,AdCMVLacZ組為0.96];AdCMVahAT1組AT1R蛋白錶達水平(A值為176.39±21.63)顯著低于DMEM組(A值為310.21±29.82)和AdCMVLacZ組(A值為306.45±30.09),差異均有統計學意義(P均＜0.01),轉染AdCMVahAT1後24 h的PASMC遷移距離為(40.93±9.69)μm,顯著短于DMEM組的(78.23±11.79)μm和AdCMVLacZ組的(77.80±10.66)μm,差異均有統計學意義(P均＜0.01).給予AngⅡ刺激48 h,AngⅡ組PASMC的增殖指數(59.69±3.46)顯著高于DMEM組(50.25±1.34,P<0.01),轉染AdCMVahAT1後再用AngⅡ刺激48 h的AdCMVahAT1+AngⅡ組PASMC的增殖指數(24.67±3.19)則顯著低于3箇對照組(P均＜0.01),而AdCMVLacZ+AngⅡ組(59.53±3.26)和AngⅡ組比較差異無統計學意義(P>0.05).此時AdCMVahAT1+AngⅡ組齣現凋亡峰,而在其他各組未齣現明顯凋亡峰,AdCMVahAT1+AngⅡ組凋亡率為(24.70±4.04)%,分彆與DMEM組的(2.05±1.71)%、AngⅡ組的(2.19±1.99)%、AdCMVLacZ+AngⅡ組的(2.11±1.85)%比較, P均＜0.01.結論反義AT1R通過抑製AT1R的錶達,能抑製AngⅡ介導的PASMC遷移和增殖,併具有促PASMC凋亡的作用.
목적탐토선병독개도적반의혈관긴장소Ⅱ(AngⅡ)1형수체(AT1R)cDNA전염대배양적인폐동맥평활기세포(PASMC)천이、증식화조망적영향.방법구건중조반의인AT1R선병독(AdCMVahAT1)화표체β반유당감매적대조선병독재체AdCMVLacZ,장배양적PASMC분위DMEM조、AdCMVLacZ조화AdCMVahAT1조,분별급여불동적간예인소간예PASMC,용반정량역전록-취합매련반응(RT-PCR)화면역조화급채색도상분석법검측AT1R적표체정황,병용개량적천이소실진행세포천이실험.우장배양적PASMC분위DMEM조,AngⅡ조,AdCMVLacZ+AngⅡ조화AdCMVahAT1+AngⅡ조,용류식세포의검측각조PASMC적증식지수화조망솔,회제DNA합성직방도.결과전염AdCMVahAT1후48 h적PASMC,AT1R mRNA명현저우대조조[AT1R/β-actin흡광도(A)비치:AdCMVahAT1조위0.48,DMEM조위0.97,AdCMVLacZ조위0.96];AdCMVahAT1조AT1R단백표체수평(A치위176.39±21.63)현저저우DMEM조(A치위310.21±29.82)화AdCMVLacZ조(A치위306.45±30.09),차이균유통계학의의(P균＜0.01),전염AdCMVahAT1후24 h적PASMC천이거리위(40.93±9.69)μm,현저단우DMEM조적(78.23±11.79)μm화AdCMVLacZ조적(77.80±10.66)μm,차이균유통계학의의(P균＜0.01).급여AngⅡ자격48 h,AngⅡ조PASMC적증식지수(59.69±3.46)현저고우DMEM조(50.25±1.34,P<0.01),전염AdCMVahAT1후재용AngⅡ자격48 h적AdCMVahAT1+AngⅡ조PASMC적증식지수(24.67±3.19)칙현저저우3개대조조(P균＜0.01),이AdCMVLacZ+AngⅡ조(59.53±3.26)화AngⅡ조비교차이무통계학의의(P>0.05).차시AdCMVahAT1+AngⅡ조출현조망봉,이재기타각조미출현명현조망봉,AdCMVahAT1+AngⅡ조조망솔위(24.70±4.04)%,분별여DMEM조적(2.05±1.71)%、AngⅡ조적(2.19±1.99)%、AdCMVLacZ+AngⅡ조적(2.11±1.85)%비교, P균＜0.01.결론반의AT1R통과억제AT1R적표체,능억제AngⅡ개도적PASMC천이화증식,병구유촉PASMC조망적작용.
