动物学报
動物學報
동물학보
ACTA ZOOLOGICA SINICA
2002年
6期
790-796
,共7页
常团结%陈蕾%路子显%陈宛新%孟昆%朱祯
常糰結%陳蕾%路子顯%陳宛新%孟昆%硃禎
상단결%진뢰%로자현%진완신%맹곤%주정
棉铃虫%幼虫%类胰蛋白酶%同源性%基因表达%酶活性
棉鈴蟲%幼蟲%類胰蛋白酶%同源性%基因錶達%酶活性
면령충%유충%류이단백매%동원성%기인표체%매활성
根据昆虫类胰蛋白酶序列的保守性设计了一对引物,以棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫中肠总RNA反转录出cDNA第一链作为模板,利用RT-PCR,分离出了一种棉铃虫类胰蛋白酶(HaT)基因的cDNA序列.分析表明该cDNA序列的开放阅读框为696 bp,编码一个由231个氨基酸残基组成的多肽,推测的氨基酸序列具有His57、Asp102、Ser192组成的电荷中继网,决定胰蛋白酶底物专一性的Asp189,底物结合部位的Gly216和Gly226残基,及其它胰蛋白酶结构上的保守区域.氨基酸序列同源性比较表明:HaT同其它鳞翅目昆虫类胰蛋白酶有较高的同源性,同源性在44%～79%之间.为研究棉铃虫类胰蛋白酶基因(hat)编码产物的活性,将其插入原核表达载体pGEX4T-3和pET23b中,并在大肠杆菌中进行了诱导表达,结果表明,GST-HaT融合蛋白在大肠杆菌中进行了特异表达,非融合形式的表达产物HaT具有胰蛋白酶催化活性.
根據昆蟲類胰蛋白酶序列的保守性設計瞭一對引物,以棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)幼蟲中腸總RNA反轉錄齣cDNA第一鏈作為模闆,利用RT-PCR,分離齣瞭一種棉鈴蟲類胰蛋白酶(HaT)基因的cDNA序列.分析錶明該cDNA序列的開放閱讀框為696 bp,編碼一箇由231箇氨基痠殘基組成的多肽,推測的氨基痠序列具有His57、Asp102、Ser192組成的電荷中繼網,決定胰蛋白酶底物專一性的Asp189,底物結閤部位的Gly216和Gly226殘基,及其它胰蛋白酶結構上的保守區域.氨基痠序列同源性比較錶明:HaT同其它鱗翅目昆蟲類胰蛋白酶有較高的同源性,同源性在44%～79%之間.為研究棉鈴蟲類胰蛋白酶基因(hat)編碼產物的活性,將其插入原覈錶達載體pGEX4T-3和pET23b中,併在大腸桿菌中進行瞭誘導錶達,結果錶明,GST-HaT融閤蛋白在大腸桿菌中進行瞭特異錶達,非融閤形式的錶達產物HaT具有胰蛋白酶催化活性.
근거곤충류이단백매서렬적보수성설계료일대인물,이면령충(Helicoverpa armigera)유충중장총RNA반전록출cDNA제일련작위모판,이용RT-PCR,분리출료일충면령충류이단백매(HaT)기인적cDNA서렬.분석표명해cDNA서렬적개방열독광위696 bp,편마일개유231개안기산잔기조성적다태,추측적안기산서렬구유His57、Asp102、Ser192조성적전하중계망,결정이단백매저물전일성적Asp189,저물결합부위적Gly216화Gly226잔기,급기타이단백매결구상적보수구역.안기산서렬동원성비교표명:HaT동기타린시목곤충류이단백매유교고적동원성,동원성재44%～79%지간.위연구면령충류이단백매기인(hat)편마산물적활성,장기삽입원핵표체재체pGEX4T-3화pET23b중,병재대장간균중진행료유도표체,결과표명,GST-HaT융합단백재대장간균중진행료특이표체,비융합형식적표체산물HaT구유이단백매최화활성.
