中国现代普通外科进展
中國現代普通外科進展
중국현대보통외과진전
CHINESE JOURNAL OF CURRENT ADVANCES IN GENERAL SURGERY
2004年
4期
212-214
,共3页
董平%刘执玉%高杰%李贵宝%毕玉顺%田铧%丁兆习
董平%劉執玉%高傑%李貴寶%畢玉順%田鏵%丁兆習
동평%류집옥%고걸%리귀보%필옥순%전화%정조습
血管内皮生长因子·真核细胞·杂合子·基因表达
血管內皮生長因子·真覈細胞·雜閤子·基因錶達
혈관내피생장인자·진핵세포·잡합자·기인표체
目的:构建含有绿色荧光蛋白基因的人血管内皮生长因子C基因的真核表达载体,检测该基因在真核细胞中的表达,研究VEGF-C基因在淋巴管生成中的作用.方法:含有绿色荧光蛋白基因的质粒pEGFP-1通过末端平滑化,酶切获得5'(粘端)BamHI-EGFP-XbaI(平端)3'片断,已经构建的VEGF-C表达载体pcDNA3.1/VEGF-C通过末端平滑化,酶切获得5'-(粘端)BamHI-pcDNA3.1-目的基因-KpnI(平端)3',两片段连接构建含有绿色荧光蛋白的真核表达载体,琼脂糖凝胶电泳并测序检测插入片段的正确性.将该载体通过脂质体转染到真核细胞CHO中,观察绿色荧光蛋白在CHO细胞中的表达情况.通过G418筛选阳性转染细胞,提取总RNA,行RT-PCR,PCR产物琼脂糖凝胶电泳观察VEGF-C基因在CHO细胞中的表达情况.结果:琼脂糖凝胶电泳证实了插入EGFP片段的大小,测序结果证实了插入片段的正确性,CHO细胞中看到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR产物中含有VEGF-C cDNA.结论:成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的VEGF-C真核表达载体并检测到在真核细胞CHO中的表达.
目的:構建含有綠色熒光蛋白基因的人血管內皮生長因子C基因的真覈錶達載體,檢測該基因在真覈細胞中的錶達,研究VEGF-C基因在淋巴管生成中的作用.方法:含有綠色熒光蛋白基因的質粒pEGFP-1通過末耑平滑化,酶切穫得5'(粘耑)BamHI-EGFP-XbaI(平耑)3'片斷,已經構建的VEGF-C錶達載體pcDNA3.1/VEGF-C通過末耑平滑化,酶切穫得5'-(粘耑)BamHI-pcDNA3.1-目的基因-KpnI(平耑)3',兩片段連接構建含有綠色熒光蛋白的真覈錶達載體,瓊脂糖凝膠電泳併測序檢測插入片段的正確性.將該載體通過脂質體轉染到真覈細胞CHO中,觀察綠色熒光蛋白在CHO細胞中的錶達情況.通過G418篩選暘性轉染細胞,提取總RNA,行RT-PCR,PCR產物瓊脂糖凝膠電泳觀察VEGF-C基因在CHO細胞中的錶達情況.結果:瓊脂糖凝膠電泳證實瞭插入EGFP片段的大小,測序結果證實瞭插入片段的正確性,CHO細胞中看到綠色熒光蛋白的錶達,RT-PCR產物中含有VEGF-C cDNA.結論:成功構建瞭含有綠色熒光蛋白基因的VEGF-C真覈錶達載體併檢測到在真覈細胞CHO中的錶達.
목적:구건함유록색형광단백기인적인혈관내피생장인자C기인적진핵표체재체,검측해기인재진핵세포중적표체,연구VEGF-C기인재림파관생성중적작용.방법:함유록색형광단백기인적질립pEGFP-1통과말단평활화,매절획득5'(점단)BamHI-EGFP-XbaI(평단)3'편단,이경구건적VEGF-C표체재체pcDNA3.1/VEGF-C통과말단평활화,매절획득5'-(점단)BamHI-pcDNA3.1-목적기인-KpnI(평단)3',량편단련접구건함유록색형광단백적진핵표체재체,경지당응효전영병측서검측삽입편단적정학성.장해재체통과지질체전염도진핵세포CHO중,관찰록색형광단백재CHO세포중적표체정황.통과G418사선양성전염세포,제취총RNA,행RT-PCR,PCR산물경지당응효전영관찰VEGF-C기인재CHO세포중적표체정황.결과:경지당응효전영증실료삽입EGFP편단적대소,측서결과증실료삽입편단적정학성,CHO세포중간도록색형광단백적표체,RT-PCR산물중함유VEGF-C cDNA.결론:성공구건료함유록색형광단백기인적VEGF-C진핵표체재체병검측도재진핵세포CHO중적표체.
