CAJ | 학술논문

目的克隆从我国四川省分离的多房棘球绦虫Em18抗原基因片段,表达重组抗原,用于多房棘球蚴病(AE)的诊断,并用患者血清对其诊断价值进行评价.方法 PCR扩增目的基因片段与质粒载体pET28a(+)连接构建表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株表达重组蛋白,用镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂(NI-NTAagarose)亲和层析纯化重组抗原,酶联免疫吸附测定(ELISA)评价重组抗原的血清学诊断效果.结果获得两个高效表达克隆ReEm18-1和ReEm18-2.其中ReEm18-1与预期序列一致,ReEm18-2为同一序列,但有27 bp的核苷酸缺失.两个克隆表达的融合蛋白相对分子质量(Mr)分别为28 000和26 000.对101例AE、47例细粒棘球蚴病、30例囊尾蚴病、10例肝癌、9例血吸虫病和40名健康人共237份血清进行ELISA检测,结果显示,ReEm18-1和ReEm18-2重组抗原对AE血清诊断的敏感性为86.1%和90.1%、特异性为93.4%和94.1%、阳性预期值为90.6%和91.9%、阴性预期值为90.1%和92.8%、诊断效率分别为90.3%和92.4%;对58例AE患者肝脏病灶大小与重组抗原检测血清平均吸光度(A)的相关性比较分析结果表明,抗体反应水平在病程早期有较好的相关性.结论Em18重组抗原对AE具有特异性诊断价值,检测的抗体水平在早期与病程有较好的相关性,对筛查早期患者有一定应用价值.ReEm18-2与ReEm18-1两者的效果相似.
목적극륭종아국사천성분리적다방극구조충Em18항원기인편단,표체중조항원,용우다방극구유병(AE)적진단,병용환자혈청대기진단개치진행평개.방법 PCR확증목적기인편단여질립재체pET28a(+)련접구건표체질립,전화대장애희균BL21(DE3)균주표체중조단백,용얼-차담기삼을산경지당수지(NI-NTAagarose)친화층석순화중조항원,매련면역흡부측정(ELISA)평개중조항원적혈청학진단효과.결과획득량개고효표체극륭ReEm18-1화ReEm18-2.기중ReEm18-1여예기서렬일치,ReEm18-2위동일서렬,단유27 bp적핵감산결실.량개극륭표체적융합단백상대분자질량(Mr)분별위28 000화26 000.대101례AE、47례세립극구유병、30례낭미유병、10례간암、9례혈흡충병화40명건강인공237빈혈청진행ELISA검측,결과현시,ReEm18-1화ReEm18-2중조항원대AE혈청진단적민감성위86.1%화90.1%、특이성위93.4%화94.1%、양성예기치위90.6%화91.9%、음성예기치위90.1%화92.8%、진단효솔분별위90.3%화92.4%;대58례AE환자간장병조대소여중조항원검측혈청평균흡광도(A)적상관성비교분석결과표명,항체반응수평재병정조기유교호적상관성.결론Em18중조항원대AE구유특이성진단개치,검측적항체수평재조기여병정유교호적상관성,대사사조기환자유일정응용개치.ReEm18-2여ReEm18-1량자적효과상사.