中华男科学杂志
中華男科學雜誌
중화남과학잡지
NATIONAL JOURNAL OF ANDROLOGY
2006年
10期
867-871
,共5页
王旻%石建莉%程国艳%胡燕琴%刘春萌%徐晨
王旻%石建莉%程國豔%鬍燕琴%劉春萌%徐晨
왕민%석건리%정국염%호연금%류춘맹%서신
人细胞核自身抗原精子蛋白%基因克隆%蛋白表达%多克隆抗体
人細胞覈自身抗原精子蛋白%基因剋隆%蛋白錶達%多剋隆抗體
인세포핵자신항원정자단백%기인극륭%단백표체%다극륭항체
目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备.方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28a(+)中.在E.coli BL21中,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His融合蛋白.样品超声处理后,经镍离子亲和树脂进行亲和层析纯化.用纯化的重组蛋白免疫家兔获取多克隆抗体.结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及表达的重组蛋白经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白.ELISA证实免疫家兔后获得高效价的抗体.结论:用上述原核生物表达的方法可以得到纯化的hNASP蛋白,用纯化的蛋白免疫家兔也能获得高效价的抗体.
目的:穫得純化的人細胞覈自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多剋隆抗體,為其功能研究做準備.方法:提取人睪汍組織總RNA,用自行設計的引物,PCR擴增hNASP的一段序列,PCR產物經TA剋隆後,通過BamH Ⅰ和HindⅢ雙酶切剋隆到pET-28a(+)中.在E.coli BL21中,用異丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達His融閤蛋白.樣品超聲處理後,經鎳離子親和樹脂進行親和層析純化.用純化的重組蛋白免疫傢兔穫取多剋隆抗體.結果:對錶達重組蛋白的質粒進行DNA測序以及錶達的重組蛋白經過十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析,證實穫取瞭目的蛋白.ELISA證實免疫傢兔後穫得高效價的抗體.結論:用上述原覈生物錶達的方法可以得到純化的hNASP蛋白,用純化的蛋白免疫傢兔也能穫得高效價的抗體.
목적:획득순화적인세포핵자신항원정자단백(hNASP)급기다극륭항체,위기공능연구주준비.방법:제취인고환조직총RNA,용자행설계적인물,PCR확증hNASP적일단서렬,PCR산물경TA극륭후,통과BamH Ⅰ화HindⅢ쌍매절극륭도pET-28a(+)중.재E.coli BL21중,용이병기-β-류대반유당감(IPTG)유도표체His융합단백.양품초성처리후,경얼리자친화수지진행친화층석순화.용순화적중조단백면역가토획취다극륭항체.결과:대표체중조단백적질립진행DNA측서이급표체적중조단백경과십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석,증실획취료목적단백.ELISA증실면역가토후획득고효개적항체.결론:용상술원핵생물표체적방법가이득도순화적hNASP단백,용순화적단백면역가토야능획득고효개적항체.
