中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
14期
2705-2708
,共4页
朱希山%张斌%刘瑞%豆晓伟%刘慧英%赵春华
硃希山%張斌%劉瑞%豆曉偉%劉慧英%趙春華
주희산%장빈%류서%두효위%류혜영%조춘화
骨髓间充质干细胞%造血干细胞%基质金属蛋白酶9%慢性粒细胞白血病
骨髓間充質榦細胞%造血榦細胞%基質金屬蛋白酶9%慢性粒細胞白血病
골수간충질간세포%조혈간세포%기질금속단백매9%만성립세포백혈병
背景:骨髓微环境中持续存在的肿瘤干细胞改变了骨髓基质细胞及细胞外基质的特征,从而参与了造血干细胞恶性转化的过程.目的:探讨慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9的表达,及其对造血干细胞黏附的影响.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-09/2008-02在北京协和医学院基础学院完成.材料:骨髓标本来源于4例慢性粒细胞白血病患者和4例健康志愿者,由解放军第三○九医院血液科提供.脐血由北京脐带血造血干细胞库提供,293T细胞由南开大学孔德领教授馈赠.方法:分别采集健康志愿者和慢性粒细胞白血病患者的骨髓,Ficoll法体外分离培养获得骨髓间充质干细胞.将脐血分装,离心弃上清,吸取中河层,同法分离培养获得脐血单个核细胞.取处于对数生长期的骨髓间充质干细胞,按1×107L-1接种于96孔板,培养至近100%融合时再将脐血单个核细胞按1×105/孔接种于同一培养板中,孵育1 h后对收集未黏附细胞,计算黏附率.取第2代骨髓间充质干细胞,ELISA法检测细胞培养上清中可溶性形式细胞问黏附分子1的质量浓度.构建MPP-9-siRNA干扰载体,以脂质体法转染包装293T细胞,扩增病毒后进行骨髓间充质干细胞转染.主要观察指标:健康供者与慢性粒细胞白血病患者之间的5项指标比较,病毒转染前后慢性粒细胞白血病患者自身的3项指标比较.结果:与健康供者比较,慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9 mRNA及蛋白表达水平明显升高,细胞间黏附分子1的蛋白表达无明显差异,培养上清中可溶性形式细胞间黏附分子1的质量浓度明显升高(P＜0.05),对脐血单个核细胞的黏附率明显降低(P＜0.05).与未转染的骨髓间充质干细胞比较,病毒转染后骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9mRNA表达明显降低,细胞间黏附分子1的蛋白表达未受影响,对脐血单个核细胞的黏附率明显增加(P＜0.05).结论:慢性粒细胞自血病患者的骨髓间充质干细胞可能存在基质金属蛋白酶9裂解细胞间黏附分子1的作用机制,推测游离的可溶性形式细胞间黏附分子1可能阻断了LFA-1的结合位点,从而影响骨髓间充质干细胞对造血干细胞的黏附.
揹景:骨髓微環境中持續存在的腫瘤榦細胞改變瞭骨髓基質細胞及細胞外基質的特徵,從而參與瞭造血榦細胞噁性轉化的過程.目的:探討慢性粒細胞白血病患者骨髓間充質榦細胞基質金屬蛋白酶9的錶達,及其對造血榦細胞黏附的影響.設計、時間及地點:細胞學體外對照觀察,于2007-09/2008-02在北京協和醫學院基礎學院完成.材料:骨髓標本來源于4例慢性粒細胞白血病患者和4例健康誌願者,由解放軍第三○九醫院血液科提供.臍血由北京臍帶血造血榦細胞庫提供,293T細胞由南開大學孔德領教授饋贈.方法:分彆採集健康誌願者和慢性粒細胞白血病患者的骨髓,Ficoll法體外分離培養穫得骨髓間充質榦細胞.將臍血分裝,離心棄上清,吸取中河層,同法分離培養穫得臍血單箇覈細胞.取處于對數生長期的骨髓間充質榦細胞,按1×107L-1接種于96孔闆,培養至近100%融閤時再將臍血單箇覈細胞按1×105/孔接種于同一培養闆中,孵育1 h後對收集未黏附細胞,計算黏附率.取第2代骨髓間充質榦細胞,ELISA法檢測細胞培養上清中可溶性形式細胞問黏附分子1的質量濃度.構建MPP-9-siRNA榦擾載體,以脂質體法轉染包裝293T細胞,擴增病毒後進行骨髓間充質榦細胞轉染.主要觀察指標:健康供者與慢性粒細胞白血病患者之間的5項指標比較,病毒轉染前後慢性粒細胞白血病患者自身的3項指標比較.結果:與健康供者比較,慢性粒細胞白血病患者骨髓間充質榦細胞基質金屬蛋白酶9 mRNA及蛋白錶達水平明顯升高,細胞間黏附分子1的蛋白錶達無明顯差異,培養上清中可溶性形式細胞間黏附分子1的質量濃度明顯升高(P＜0.05),對臍血單箇覈細胞的黏附率明顯降低(P＜0.05).與未轉染的骨髓間充質榦細胞比較,病毒轉染後骨髓間充質榦細胞基質金屬蛋白酶9mRNA錶達明顯降低,細胞間黏附分子1的蛋白錶達未受影響,對臍血單箇覈細胞的黏附率明顯增加(P＜0.05).結論:慢性粒細胞自血病患者的骨髓間充質榦細胞可能存在基質金屬蛋白酶9裂解細胞間黏附分子1的作用機製,推測遊離的可溶性形式細胞間黏附分子1可能阻斷瞭LFA-1的結閤位點,從而影響骨髓間充質榦細胞對造血榦細胞的黏附.
배경:골수미배경중지속존재적종류간세포개변료골수기질세포급세포외기질적특정,종이삼여료조혈간세포악성전화적과정.목적:탐토만성립세포백혈병환자골수간충질간세포기질금속단백매9적표체,급기대조혈간세포점부적영향.설계、시간급지점:세포학체외대조관찰,우2007-09/2008-02재북경협화의학원기출학원완성.재료:골수표본래원우4례만성립세포백혈병환자화4례건강지원자,유해방군제삼○구의원혈액과제공.제혈유북경제대혈조혈간세포고제공,293T세포유남개대학공덕령교수궤증.방법:분별채집건강지원자화만성립세포백혈병환자적골수,Ficoll법체외분리배양획득골수간충질간세포.장제혈분장,리심기상청,흡취중하층,동법분리배양획득제혈단개핵세포.취처우대수생장기적골수간충질간세포,안1×107L-1접충우96공판,배양지근100%융합시재장제혈단개핵세포안1×105/공접충우동일배양판중,부육1 h후대수집미점부세포,계산점부솔.취제2대골수간충질간세포,ELISA법검측세포배양상청중가용성형식세포문점부분자1적질량농도.구건MPP-9-siRNA간우재체,이지질체법전염포장293T세포,확증병독후진행골수간충질간세포전염.주요관찰지표:건강공자여만성립세포백혈병환자지간적5항지표비교,병독전염전후만성립세포백혈병환자자신적3항지표비교.결과:여건강공자비교,만성립세포백혈병환자골수간충질간세포기질금속단백매9 mRNA급단백표체수평명현승고,세포간점부분자1적단백표체무명현차이,배양상청중가용성형식세포간점부분자1적질량농도명현승고(P＜0.05),대제혈단개핵세포적점부솔명현강저(P＜0.05).여미전염적골수간충질간세포비교,병독전염후골수간충질간세포기질금속단백매9mRNA표체명현강저,세포간점부분자1적단백표체미수영향,대제혈단개핵세포적점부솔명현증가(P＜0.05).결론:만성립세포자혈병환자적골수간충질간세포가능존재기질금속단백매9렬해세포간점부분자1적작용궤제,추측유리적가용성형식세포간점부분자1가능조단료LFA-1적결합위점,종이영향골수간충질간세포대조혈간세포적점부.
