CAJ | 학술논문

目的体外诱导成人骨髓问充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化,并探讨分化过程中多效蛋白(PTN)mRNA的表达,以了解MSCs向神经元样细胞分化的特性和机制.方法密度梯度离心加贴壁培养法分离成人MSCs,原代和传代培养.取第6代MSCs设对照和试验组进行诱导,诱导后30 min至3 d,观察细胞形态并计数.免疫细胞化学法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定分化后细胞神经细胞特异性表面标志神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白(MAP)-2,胶原酸性蛋白(GFAP)和诱导前、诱导后12 h PTN mRNA的表达.结果接种24 h后MSCs开始贴壁,呈圆形或椭圆形.3 d后可见梭状细胞呈集落状生长,10～14 d融合.第5～6代时呈现较均一的成纤维细胞样形态.诱导后胞体向胞核收缩;出现双极及多极细胞.12 h变形细胞增多,细长突起相互连接.24 h后变形细胞增多不明显.诱导后12 h大部分细胞表达NSE(64.79±0.07)%、MAP-2(60.05±0.09)%,未检测到GFAP的表达,RT-PCR半定量检测有NSE mRNA的表达(0.66±0.15).实验组诱导后12 h细胞有PIN mRNA的表达(0.689±0.017).结论建立了稳定的成人MSCs培养增殖体系,MSCs可体外诱导分化为神经元样细胞,在分化过程中有外观形态变化和特异性标志物NSE和MAP-2的表达,同时有PTN mRNA的表达,提示PTN可能参与调控了MSCs向神经元样细胞的分化.
목적 체외유도성인골수문충질간세포(MSCs)향신경원양세포분화,병탐토분화과정중다효단백(PTN)mRNA적표체,이료해MSCs향신경원양세포분화적특성화궤제.방법 밀도제도리심가첩벽배양법분리성인MSCs,원대화전대배양.취제6대MSCs설대조화시험조진행유도,유도후30 min지3 d,관찰세포형태병계수.면역세포화학법화반전록-취합매련반응(RT-PCR)법측정분화후세포신경세포특이성표면표지신경원희순화매(NSE)、미관상관단백(MAP)-2,효원산성단백(GFAP)화유도전、유도후12 h PTN mRNA적표체.결과 접충24 h후MSCs개시첩벽,정원형혹타원형.3 d후가견사상세포정집락상생장,10～14 d융합.제5～6대시정현교균일적성섬유세포양형태.유도후포체향포핵수축;출현쌍겁급다겁세포.12 h변형세포증다,세장돌기상호련접.24 h후변형세포증다불명현.유도후12 h대부분세포표체NSE(64.79±0.07)%、MAP-2(60.05±0.09)%,미검측도GFAP적표체,RT-PCR반정량검측유NSE mRNA적표체(0.66±0.15).실험조유도후12 h세포유PIN mRNA적표체(0.689±0.017).결론 건립료은정적성인MSCs배양증식체계,MSCs가체외유도분화위신경원양세포,재분화과정중유외관형태변화화특이성표지물NSE화MAP-2적표체,동시유PTN mRNA적표체,제시PTN가능삼여조공료MSCs향신경원양세포적분화.