华中师范大学学报（自然科学版）
華中師範大學學報（自然科學版）
화중사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF CENTRAL CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2009年
3期
474-480
,共7页
张娟%夏坤%苏紫君%周明
張娟%夏坤%囌紫君%週明
장연%하곤%소자군%주명
藻蓝蛋白β亚基%裂合酶CpcSl和CpcTl%复合物%亲和层析
藻藍蛋白β亞基%裂閤酶CpcSl和CpcTl%複閤物%親和層析
조람단백β아기%렬합매CpcSl화CpcTl%복합물%친화층석
研究证实裂合酶CpcSl、CpcTl能分别催化藻蓝蛋白β亚基(简称CpcB)的两个色素结合位点(84位和155位)共价偶联藻蓝色素PCB(phycocyanobilin),但通过实验发现仅CpcSl和CpcTl共同催化CpcB无法生成天然构像的色素蛋白.为了挑选出辅助裂合酶,经过综合分析,筛选出6个与CpcSl、CpcTl同源的裂合酶.将编码裂合酶的基因按照本实验的需求,重新构建在其它载体上,在大肠杆菌BL21体内表达出蛋白后,分别与CpcSl、CpcTl混合·利用亲和层析分离,然后通过蛋白质电泳图谱初步分析裂合酶之间形成复合物的情况.能形成复合物的裂合酶,再与CpcSl、CpcTl及脱辅基蛋白共同转入大肠杆菌BL21体内进行体内重组研究.结果表明,CpcTl能分别与CpcSl、CpcT2、PecF形成复合物,但这些复合物均不能辅助催化CpcB生成天然产物.
研究證實裂閤酶CpcSl、CpcTl能分彆催化藻藍蛋白β亞基(簡稱CpcB)的兩箇色素結閤位點(84位和155位)共價偶聯藻藍色素PCB(phycocyanobilin),但通過實驗髮現僅CpcSl和CpcTl共同催化CpcB無法生成天然構像的色素蛋白.為瞭挑選齣輔助裂閤酶,經過綜閤分析,篩選齣6箇與CpcSl、CpcTl同源的裂閤酶.將編碼裂閤酶的基因按照本實驗的需求,重新構建在其它載體上,在大腸桿菌BL21體內錶達齣蛋白後,分彆與CpcSl、CpcTl混閤·利用親和層析分離,然後通過蛋白質電泳圖譜初步分析裂閤酶之間形成複閤物的情況.能形成複閤物的裂閤酶,再與CpcSl、CpcTl及脫輔基蛋白共同轉入大腸桿菌BL21體內進行體內重組研究.結果錶明,CpcTl能分彆與CpcSl、CpcT2、PecF形成複閤物,但這些複閤物均不能輔助催化CpcB生成天然產物.
연구증실렬합매CpcSl、CpcTl능분별최화조람단백β아기(간칭CpcB)적량개색소결합위점(84위화155위)공개우련조람색소PCB(phycocyanobilin),단통과실험발현부CpcSl화CpcTl공동최화CpcB무법생성천연구상적색소단백.위료도선출보조렬합매,경과종합분석,사선출6개여CpcSl、CpcTl동원적렬합매.장편마렬합매적기인안조본실험적수구,중신구건재기타재체상,재대장간균BL21체내표체출단백후,분별여CpcSl、CpcTl혼합·이용친화층석분리,연후통과단백질전영도보초보분석렬합매지간형성복합물적정황.능형성복합물적렬합매,재여CpcSl、CpcTl급탈보기단백공동전입대장간균BL21체내진행체내중조연구.결과표명,CpcTl능분별여CpcSl、CpcT2、PecF형성복합물,단저사복합물균불능보조최화CpcB생성천연산물.
