生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2010年
3期
20-23,47
,共5页
刘建玲%康雪莲%董辉%王嘉颖%曹琳%徐晓晶%金维荣
劉建玲%康雪蓮%董輝%王嘉穎%曹琳%徐曉晶%金維榮
류건령%강설련%동휘%왕가영%조림%서효정%금유영
分泌磷蛋白2%基因克隆%原核表达%纯化%生物活性
分泌燐蛋白2%基因剋隆%原覈錶達%純化%生物活性
분비린단백2%기인극륭%원핵표체%순화%생물활성
提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性.重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET-22b(+).IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达.优化诱导表达条件,获得可溶性表达的目的蛋白,纯化后纯度达90%,western blot表明其具有His标签抗原活性.重组SPP2成熟蛋白可抑制木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白为底物),重量抑制比为1:3.1,抑制比活性为2511U/mg.
提取人肝癌組織RNA,通過RT-PCR擴增人SPP2成熟蛋白編碼區基因併剋隆至原覈錶達載體pET-22b(+),將測序正確的質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導重組蛋白錶達,用Ni-NTA柱進行純化,SDS-PAGE電泳及Western blot檢測併證實目的蛋白的錶達,通過重組蛋白對木瓜蛋白酶的抑製作用驗證其生物學活性.重組質粒測序和酶切結果顯示SPP2成熟蛋白基因已成功剋隆到pET-22b(+).IPTG誘導重組菌後有25kDa大小的目的蛋白錶達.優化誘導錶達條件,穫得可溶性錶達的目的蛋白,純化後純度達90%,western blot錶明其具有His標籤抗原活性.重組SPP2成熟蛋白可抑製木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白為底物),重量抑製比為1:3.1,抑製比活性為2511U/mg.
제취인간암조직RNA,통과RT-PCR확증인SPP2성숙단백편마구기인병극륭지원핵표체재체pET-22b(+),장측서정학적질립전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도중조단백표체,용Ni-NTA주진행순화,SDS-PAGE전영급Western blot검측병증실목적단백적표체,통과중조단백대목과단백매적억제작용험증기생물학활성.중조질립측서화매절결과현시SPP2성숙단백기인이성공극륭도pET-22b(+).IPTG유도중조균후유25kDa대소적목적단백표체.우화유도표체조건,획득가용성표체적목적단백,순화후순도체90%,western blot표명기구유His표첨항원활성.중조SPP2성숙단백가억제목과단백매적수해작용(락단백위저물),중량억제비위1:3.1,억제비활성위2511U/mg.
