国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2011年
5期
529-530
,共2页
匡多秀%李萍%周新%曲喜英%朱昕力%谢小兵
劻多秀%李萍%週新%麯喜英%硃昕力%謝小兵
광다수%리평%주신%곡희영%주흔력%사소병
开角型%青光眼%基因%突变
開角型%青光眼%基因%突變
개각형%청광안%기인%돌변
目的 在前续课题基础上构建针对MYOC基因的RNAi慢病毒载体及C1009del突变质粒载体,并筛选出小梁网细胞作为后续转染阳性质粒合适的药物G418浓度,为下一步将突变质粒载体导入小梁网细胞使其表达突变蛋白,研究突变蛋白的功能、分泌特点等,进而研究原发性开角型青光眼的致病机制提供技术支持.方法 采用基因定向克隆方法 构建目的 基因过表达载体及4种RNAi慢病毒载体、凝胶电泳及基因测序验证;采用Western blot及基因测序方法 筛选有效的RNA干扰靶点;应用基因定点突变技术合成C1009del突变序列,构建突变质粒载体;培养小梁网细胞并用G418筛选.结果 经酶切和基因测序证实MYOC基因过表达载体、RNAi慢病毒载体及C1009del突变质粒载体构建成功,并筛选出PSC413为最有效的RNA干扰靶点;G418终浓度为400 μL/mL及更高浓度的孔细胞凋亡.结论 本实验构建的RNAi慢病毒载体能成功将正常MYOC基因干扰掉,并将G418为400 μL/mL作为后续小梁网细胞转染成功的最适筛选浓度,为本课题下一步将突变基因导入小梁网细胞进行突变蛋白的功能研究奠定基础.
目的 在前續課題基礎上構建針對MYOC基因的RNAi慢病毒載體及C1009del突變質粒載體,併篩選齣小樑網細胞作為後續轉染暘性質粒閤適的藥物G418濃度,為下一步將突變質粒載體導入小樑網細胞使其錶達突變蛋白,研究突變蛋白的功能、分泌特點等,進而研究原髮性開角型青光眼的緻病機製提供技術支持.方法 採用基因定嚮剋隆方法 構建目的 基因過錶達載體及4種RNAi慢病毒載體、凝膠電泳及基因測序驗證;採用Western blot及基因測序方法 篩選有效的RNA榦擾靶點;應用基因定點突變技術閤成C1009del突變序列,構建突變質粒載體;培養小樑網細胞併用G418篩選.結果 經酶切和基因測序證實MYOC基因過錶達載體、RNAi慢病毒載體及C1009del突變質粒載體構建成功,併篩選齣PSC413為最有效的RNA榦擾靶點;G418終濃度為400 μL/mL及更高濃度的孔細胞凋亡.結論 本實驗構建的RNAi慢病毒載體能成功將正常MYOC基因榦擾掉,併將G418為400 μL/mL作為後續小樑網細胞轉染成功的最適篩選濃度,為本課題下一步將突變基因導入小樑網細胞進行突變蛋白的功能研究奠定基礎.
목적 재전속과제기출상구건침대MYOC기인적RNAi만병독재체급C1009del돌변질립재체,병사선출소량망세포작위후속전염양성질립합괄적약물G418농도,위하일보장돌변질립재체도입소량망세포사기표체돌변단백,연구돌변단백적공능、분비특점등,진이연구원발성개각형청광안적치병궤제제공기술지지.방법 채용기인정향극륭방법 구건목적 기인과표체재체급4충RNAi만병독재체、응효전영급기인측서험증;채용Western blot급기인측서방법 사선유효적RNA간우파점;응용기인정점돌변기술합성C1009del돌변서렬,구건돌변질립재체;배양소량망세포병용G418사선.결과 경매절화기인측서증실MYOC기인과표체재체、RNAi만병독재체급C1009del돌변질립재체구건성공,병사선출PSC413위최유효적RNA간우파점;G418종농도위400 μL/mL급경고농도적공세포조망.결론 본실험구건적RNAi만병독재체능성공장정상MYOC기인간우도,병장G418위400 μL/mL작위후속소량망세포전염성공적최괄사선농도,위본과제하일보장돌변기인도입소량망세포진행돌변단백적공능연구전정기출.
