广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
15期
1945-1949
,共5页
范良生%王鸿雁%王蓓蓓%陈刚
範良生%王鴻雁%王蓓蓓%陳剛
범량생%왕홍안%왕배배%진강
柯萨奇-腺病毒受体%功能域缺失突变重组体%卵巢癌
柯薩奇-腺病毒受體%功能域缺失突變重組體%卵巢癌
가살기-선병독수체%공능역결실돌변중조체%란소암
目的 以柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)蛋白结构的功能解析作为切入点,构建不同CAR胞内域缺失突变的表达载体.方法 利用定点缺失突变策略构建CAR胞内域PKC、CK2、TYR磷酸化位点的缺失突变体及胞内域完全缺失的突变体.利用三步PCR法扩增获得相关的基因片段后,将其克隆入真核表达载体 pcDNA3.1/V5/His,通过双酶切及测序进行鉴定后,分别转染至低表达CAR的人卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,并用Werstern blot检测细胞转染后CAR的表达水平.结果 所有突变体经过测序分析均证实序列与设想的突变序列相符,各突变体在SKOV3细胞中获得了满意的表达.结论 成功构建不同CAR胞内功能域缺失突变表达载体,为后续研究CAR及其胞内不同功能域在卵巢癌中的作用机制提供了研究基础.
目的 以柯薩奇-腺病毒受體(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)蛋白結構的功能解析作為切入點,構建不同CAR胞內域缺失突變的錶達載體.方法 利用定點缺失突變策略構建CAR胞內域PKC、CK2、TYR燐痠化位點的缺失突變體及胞內域完全缺失的突變體.利用三步PCR法擴增穫得相關的基因片段後,將其剋隆入真覈錶達載體 pcDNA3.1/V5/His,通過雙酶切及測序進行鑒定後,分彆轉染至低錶達CAR的人卵巢癌細胞繫SKOV3細胞中,併用Werstern blot檢測細胞轉染後CAR的錶達水平.結果 所有突變體經過測序分析均證實序列與設想的突變序列相符,各突變體在SKOV3細胞中穫得瞭滿意的錶達.結論 成功構建不同CAR胞內功能域缺失突變錶達載體,為後續研究CAR及其胞內不同功能域在卵巢癌中的作用機製提供瞭研究基礎.
목적 이가살기-선병독수체(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)단백결구적공능해석작위절입점,구건불동CAR포내역결실돌변적표체재체.방법 이용정점결실돌변책략구건CAR포내역PKC、CK2、TYR린산화위점적결실돌변체급포내역완전결실적돌변체.이용삼보PCR법확증획득상관적기인편단후,장기극륭입진핵표체재체 pcDNA3.1/V5/His,통과쌍매절급측서진행감정후,분별전염지저표체CAR적인란소암세포계SKOV3세포중,병용Werstern blot검측세포전염후CAR적표체수평.결과 소유돌변체경과측서분석균증실서렬여설상적돌변서렬상부,각돌변체재SKOV3세포중획득료만의적표체.결론 성공구건불동CAR포내공능역결실돌변표체재체,위후속연구CAR급기포내불동공능역재란소암중적작용궤제제공료연구기출.
